АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

АНТИТЕЛА (АНТИ-HCV)

Уже первые работы утвердили высокую зна­чимость определения анти-HCV для суждения о

ионтагиозности крови. Так, риск заболеть по-сгрансфузионным гепатитом в 20 раз выше для реципиентов анти-HCV позитивной крови.

Диагностические тесты прошли трехэтапную эволюцию (от систем 1-го к системам 3-го поколения). Они предназначены для скрининга крови на зараженность вирусом гепатита С, а также для подтверждения положительных резуль­татов скринирования (конфирмативныетесты ). В первом случае используется «обычный» иммуноферментный анализ (ИФА) на твердофазной основе, окончательный вывод делается по иммуноблотингу. В системах двух первых поколе­ний антигенами служили рекомбинантные HCV-пептиды; в тестах 3-го поколения часть из них заменена на синтетические пептиды и их эпитоп-ные фрагменты (рис. 9).

Скрининговые тесты. Анти-HCV ИФА-1 (ИФА 1-го поколения) базировались на рекомбикантном пептиде С100 (С 100-3) и его фрагменте 5.1.1, полученных в первых работах по клониро­ванию HCV генома. В дальнейшем были полу­чены другие рекомбинантные и синтетические пептиды, которые вошли в состав ИФА-2 и ИФА-3(рис. 9). Системы ИФА-3, сконструированные на основе сердцевинного (С22) и неструктурных (NS3-NS5) пептидов, отличаются повышенной чувствительностью, специфичностью и выявля­ют антитела на более ранних этапах инфекции. Скринирование донорской крови при помощи ИФА-3 практически исключает передачу вируса гепа­тита С реципиентам.

По признанию многих экспертов, диффе­ренциация IgM в общем пуле анти-HCV антител не дает преимуществ в выявлении острого гепагита и контагиозности крови. Это логично, если учесть, что серодиагностика даже первичной 4CV инфекции базируется на выявлении поздне-"0 (отсроченного) иммунного ответа. Впрочем, есть данные, что определение анти-кор HCV сласса IgM способствует раннему обнаружению хлрого гепатита С и улучшает диагностику обо­стрений хронической инфекции. В целом же ин-[икация анти-HCV (IgG, IgM) решает задачу эти-•логического диагноза, но не характеризует те­рния инфекции и ее прогноза.

Подтверждающие тесты. Несмотря на высокую специфичность, современные ИФА-системы не гарантированы от гипердиагностики и от ложноположительных результатов. В связи с этим, для подтверждения положительных ИФА-тестов используется иммуноблотинг, который тоже прошел трехэтапную эволюцию (рис. 9) Принцип иммуноблотинга основан на определе­нии антител к дискретным антигенам, которые в виде фракций-«пятен»(англ. blot — пятно)фик­сируются на нитроцеллюлозных полосках и пос­ле инкубации с исследуемой сывороткой про­являются мечеными антителами точно так же как в «обычном» иммуноферментном анализе (см. «Вирус иммунодефицита»). В 3-м поколе­нии иммуноблотинговых систем используются рекомбинантные и/или синтетические пептиды, ко­дируемые С, NS3, NS4 и NS5 HCV-генами. Ре­зультат считается положительным при выявле­нии антител к двум и более антигенам. Следует, однако, помнить, что при гепатите С иммунный ответ развивается медленно. Поэтому у некото­рых больных острым гепатитом сомнительный ре­зультат (выявление антител к единственному HCV-пептиду) может со временем смениться на положительную реакцию. В таких случаях тре­буется уточнение диагноза при помощи теста на HCV-PHK вирусемию.

HCV-PHK

Известны по меньшей мере три ситуации, когда антительные тесты не выявляют HCV-инфекцию,т.е. оказываются ложноотрицательными. Это бывает

(1) в серонегативной фазе острого гепатита (первые несколько месяцев после зара­жения),

(2) у больных, получающих иммунодепрессанты (они могут быть длительно инфициро­ваны без сероконверсии)

(3) при заражении не­которыми генотипами (прежде всего 3 и 4).

Пе­речисленные недостатки меньше проявляются с тест-системами 2-го и особенно 3-го поколений. Они дополнены эпитопами высокоиммуногенных и консервативных антигенов, что позволяет улав­ливать более ранний (слабый) иммунный ответ. Вместе с тем, учитывая недостатки даже самых совершенных методов выявления анти-HCV, иногда требуются прямые доказательства присут­ствия вируса в организме. Такая необходимость возникает и в связи с проблемой неопределенных результатов иммуносерологического анализа, в том числе иммуноблотинга.

Клонирование НС V-генома обеспечило полу­чение специфических нуклеотидных последова­тельностей, которые используются для иденти­фикации HCV в исследуемом материале. Так как титры HCV-PHK в крови ничтожны, нуклеиновая кислота должна быть амплифицирована, т.е. мно­гократно прокотирована. Анализ включает полимеразную цепную реакцию после обратной транскрипции HCV-PHK в комплементарную ДНК (кДНК). Возникнув как чисто исследова­тельский прием, HCV-кДНК-ПЦР сегодня ре­ально претендует на место в диагностической практике. С ее помощью удается проследить за вирусемией, а также выявлять HCV в печени ц
других инфицированных тканях. Недавно опубликованы результаты испытания коммерческой
тест-системы, в которой для обратной транскрип­ции и кДНК-амплификации используется один
тот же фермент. Это упрощает реакцию, повышает степень ее стандартности и делает более
реальным внедрение в практику.

Определение HCV-PHK в крови наиболее часто используется для

(1) подтверждения антительных тестов (после иммуноблотинга),

(2)' раннего диагноза острого гепатита,

(3) мониторринга перинатального заражения

(4) контроля за эффективностью антивирусной терапии.

В целом, данные HCV-PHK-вирусемии хорошо коррелируют с обнаружением анти-HCV анти­тел, особенно в тестах 3-го поколения. По­ложительные результаты HCV-кДНК-ПЦР в

тетании с негативными реакциями на анти- q обычно наблюдаются в серонегативном периоде острого гепатита. Негативные показа­ли на фоне положительных антительных тестов могут быть следствием ложной позитивности последних либо низкой (не улавливаемой в [CV-кДНК-ПЦР) концентрации вируса в крови. I последнем случае повторные анализы могут ять положительный результат, отражая актива- уао вируса в гепатоцитах или во внепеченочных езервуарах.

Кроме слежения за вирусемией, HCV-кДНК-ПЦР применяется для обнаружения вируса в биоптатах печени. Это дает более полную информацию об эволюции инфекционного процесса, так як вирус способен персистировать в гепатоци-ах, не выходя в кровь или присутствуя в ней в пороговых концентрациях. Это чаще проис­ходит на ранних этапах инфекции, но наблюдается и при хроническом HCV-гепатите.

АНТИГЕНЫ

Как уже говорилось, в отличие от гепатита В, HCV-инфекция не сопровождается антигенемией, достаточной для тестирования. Меченые антитела против структурных и неструктурных UCV-белков применялись для изучения локализации вируса в печени больных хроническим ге­патитом С и шимпанзе, зараженных HCV. Исследование печеночных биоптатов в ряде слу­чаев позволяет обнаружить персистенцию HCV при отрицательных пробах на HCV-PHK-вирусемию, хотя отыскать вирус в печени непросто: боль­шинство гепатоцитов содержат менее 20 копий вируса, причем в каждом тканевом срезе пред­ставлено лишь несколько позитивных клеток.

ГЕПАТИТ Е

ВИРУСОЛОГИЯ

Вирус (вирион) гепатита Е (HEV) обнаружен М.С. Балаяном и соавт. (1983) в фекалиях боль­ных острым гепатитом, у добровольца,

Под электронным микроскопом вирионы выглядит как безоболочечная частица,с кубическим типом симметрии, 32—34 нм в диаметром с шипами и вдавлениями на поверхности (рис. 10). Геном представлен одноцепочечной плюс-РНК, размером 7,6 кб, с тремя открытыми рамками считывания (ОРС). Гены самой боль­шой из них, ОРС 1, кодируют неструктурные бел­ки, связанные с репликацией вируса. В ней име­ется гипервариабельный участок, который по последовательности нуклеотидов отличается у разных штаммов, отражая потенциальную из­менчивость вируса. Вторая по размеру, ОРС2, кодирует структурные белки капсида, содержа­щие протективные эпитопы. Функции белков, ко­дируемых ОРСЗ, неизвестны, но они, подобно про­дуктам ОРС2 включают эпитопы, реагирующие с антителами сывороток больных гепатитом Е и реконвалесцентов.

По ультраструктуре, физико-химичес­ким свойствам вириона и организации гено­ма вирус гепатита Е напоминает калицивирусы — семейство, близкое пикорнавирусам (он, в частности, похож на Norwalk вирус, один из воз­будителей вирусной диареи человека). Это определило включение вируса гепатита Е в семейство Caliciviridae, что, однако, встре­чает возражения и вряд ли будет окончатель­ным.

Дата добавления: 2015-11-26 | Просмотры: 568 | Нарушение авторских прав