АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Вопрос: Методы оценки антибиотикочувствительности.

Для того, чтобы подобрать необходимые препараты, нужно до назначения лечения взять у больного материал для исследования, выделить чистую культуру возбудителя и определить его чувствительность к антибиотикам- антибиотикограмму.

Исследованию подлежат как микроорганизмы, выделенные из патологического материала, полученного от больных, так и выделенные из объектов внешней среды.
Этапы проведения исследования по оценке антибиотикорезистентности приведены ниже, содержание каждого из этапов будет рассмотрено в соответствующих разделах.
1. Оценка целесообразности изучения антибиотикорезистентности выделенного микроорганизма (определение показания для проведения исследования).
2. Выбор методов проведения исследования и контроля качества
3. Выбор антибактериальных препаратов, подлежащих включению в исследование, его проведение, интерпретация результатов и выдача рекомендаций по лечению

В клинической практике для этих целей чаще всего используют диско-диффузионный метод (ДДМ), либо метод серийных разведений (МСР) – автоматизированный или ручной. Для этих методов необходимо предварительно выделять чистую культуру возбудителя из клинического образца, для чего требуется 18 – 24 и более часов. Далее, в случае ДДМ, чистую культуру возбудителя инкубируют на агаризованной питательной среде, на поверхность которой помещают диски с испытуемыми антибиотиками. По диаметру зон подавления роста возбудителя судят об эффективности антибиотиков против данного возбудителя. Недостатками ДДМ является большая продолжительность (от 18 и более часов) и трудоемкость анализа, зависимость его результатов от правильности приготовления стандарта мутности микробной суспензии и ряда неконтролируемых факторов: незначительного изменения состава, влажности или сдвига рН агаризованной питательной среды и так далее. В случае МСР сравнивают скорости роста чистой культуры возбудителя (по изменению оптической плотности микробной суспензии) в течение 12 и более часов в присутствии (проба) и при отсутствии (контроль) исследуемого антибиотика. МСР в автоматизированном варианте позволяет оценивать антибиотикочувствительность возбудителя быстрее, но требует дорогостоящего оборудования и ограничивает исследователя имеющимся в лаборатории коммерческим набором планшетов с антибиотиками для инкубирования культуры возбудителя.

В основу использованного биолюминесцентного метода положено измерение биолюминесценции (свечения), возникающей при взаимодействии аденозин-5-трифосфата (АТФ) с АТФ-реагентом (готовой реакционной смесью, содержащей фермент – люциферазу светляков и люциферин). Интенсивность биолюминесценции пропорциональна концентрации АТФ в реакционной смеси, которая, в свою очередь, пропорциональна титру жизнеспособных микробных клеток в анализируемом образце. При проведении анализа сравнивали интенсивность биолюминесценции в аликвотах микробной суспензии, содержащих исследуемые антибиотики (проба) и без антибиотика (контроль) через 5 часов инкубирования и рассчитывали коэффициент подавления роста микробных клеток под действием антибиотика. Предложены критерии оценки антибиотикочувствительности возбудителя биолюминесцентным методом. Результаты оценки антибиотикочувствительности возбудителя, полученные предложенным методом и ДДМ, либо МСР, хорошо совпали (коэффициент корреляции более 88%).

Обычные методы определения чувствительности возбудителя к антибиотику в хирургической практике недостаточно информативны, так как ответ клиницисты получают на 3—7-и сутки, когда в препарате уже нет надобности или когда уже произошла смена возбудителя раневого процесса более патогенным госпитальным штаммом микроба. Экспресс-методы определения чувствительности позволяют уже на следующие сутки получить ответ и целенаправленно проводить антибактериальную терапию. Эти ускоренные методы основаны на:

1) способности антибиотиков подавлять ферментативную активность чувствительных к ним микробов, что сопровождается изменением цвета соответствующего индикатора;

2) изменении окислительно-восстановительного потенциала питательной среды в процессе роста микроорганизмов, о чем судят по изменению цвета добавляемых к среде индикаторов;

3) обнаружении образования инволюционных форм бактерий под воздействием антибиотика при фазовоконтрастной микроскопии

4) применении методов целлюлознофлюоресцирующих антител и ускоренной биохимической диагностики возбудителя по 12 рациональным при знакам, учитываемым на 4 комплексных средах

5) способности дезаминировать фенилаланин и триптофандезаминазу протеев

6) более высокой протеолитической активности синегнойной палочки

7) выявлении меченных радионуклидами антител

Для экспресс-диагностики анаэробной инфекции используются люминесцентная и фазово-контрастная микроскопия

Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 576 | Нарушение авторских прав