АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Иммунолюминесцентный метод: сущность, направления, способы постановки и учета, диагностическое значение.

Прочитайте:
  1. II. Способы снижения титра и продукции ингибитора
  2. Актиномицеты. Особенности морфологии и ультраструктуры. Сходство с грибами и отличия от грибов. Способы микроскопического изучения.
  3. Алгоритм постановки жизненных иелей
  4. Анатомия нервной с-мы(головной и спинной мозг,периферические нервы,вегетативная НС)функциональное значение.
  5. Асептика, антисептика. Определение понятий. Способы проведения.
  6. Вагітна Г., звернулась в Ж.К. з терміном вагітності 34 тижні з приводу підвищення АТ, набряків нижніх кінцівок. Який аналіз необхідно зробити для остаточної постановки діагнозу?
  7. Вакцины и их виды, способы приготовления и применения. Токсины и анатоксины. Отечественные вакцинные препараты. Успехи и задачи здравоохранения в борьбе с инфекционными болезнями.
  8. Возбудитель чумы, характеристика его свойств. Резервуары микроба в природе. Пути и способы заражения человека.
  9. Временные способы остановки кровотечений
  10. Всякая боль имеет сигнальное и патогенное значение.

Иммунофлюоресцентный анализ. Один из наиболее чувст­вительных методов выявления связывания антител с антигена­ми в клетках и тканях — иммунофлюоресцентный анализ. Спе­циальный флюоресцентный краситель (флюорохром) прикреп­ляется химической связью к молекуле специфического анти­тела, не нарушая его специфичности. Часто используют кра­ситель изотиоцианат флюоресцеина, обладающий желто-зеле­ной флюоресценцией. Красители, выбранные для иммунофлю- оресцентного метода, активируются светом одной длины вол­ны (чаще — ультрафиолетовой части спектра), а сами испуска­ют лучи другой длины волны (видимого спектра). В люмине­сцентном микроскопе используется в качестве источника све­та, возбуждающего люминесценцию, ртутная лампа с системой селективных фильтров, пропускающих в окуляр только свет флюоресцирующего красителя. Прикрепляя разные красители к разным антителам, можно одновременно выявлять несколько антигенов в одной клетке.

Иммунофлюоресцентный метод является методом выбора для быстрого выявления и идентификации неизвестного мик­роорганизма в исследуемом материале, в связи с чем его на­зывают методом экспресс-диагностики.

Недостатком прямого иммунофлюоресцентного метода яв­ляется необходимость приготовления широкого набора флюо­ресцирующих специфических антител против каждого из изу­чаемых антигенов. Поэтому чаще используют непрямой имму­нофлюоресцентный метод, при котором связанные с антиге­ном специфические антитела (немеченые) выявляются с помо­щью флюоресцирующих антииммуноглобулиновых антител против иммуноглобулинов того вида, которому принадлежат антиген-специфические антитела.

Применяют и иммуногистохимический метод, при котором к специфическим антителам прикрепляется фермент (напри­мер, пероксидаза хрена), способный превратить бесцветный субстрат в окрашенные продукты его ферментативного разло­жения, видимые в обычный световой микроскоп.

Для использования при электронной микроскопии антиген- специфические антитела можно метить частицами золота, ло­кализация которых укажет на расположение соответствующего антигена.

При прямом иммунофлюоресцентном методе Кунса спе­цифические флюоресцирующие антитела образуют комплексы с микробными антигенами, которые светятся при люмине­сцентной микроскопии препаратов (рис. 10.1.2).

Непрямой метод предусматривает использование одной универсальной флюоресцирующей сыворотки — антиглобулиновой, содержащей антитела против кроличьих глобулинов, поскольку диагностические антисыворотки получают путем иммунизации кроликов. При этом на образующемся комплексе (специфические антитела + исследуемый антиген) фиксируют­ся флюоресцирующие антиглобулиновые антитела, обеспечи­вая его свечение при люминесцентной микроскопии.

На предметном стекле готовят мазок из исследуемого мате­риала, фиксируют на пламени и обрабатывают иммунной кро­личьей сывороткой, содержащей антитела против антигенов возбудителя. Для образования комплекса антиген—антитело

препарат помещают во влажную камеру и инкубируют при 37 °С в течение 15 мин, после чего тщательно промывают изотоническим раствором хлорида натрия для удаления не связывающихся с антигеном антител. Затем на препарат нано­сят флюоресцирующую антиглобулиновую сыворотку против иммуноглобулинов кролика, выдерживают в течение 15 мин при 37 °С, а затем препарат тщательно промывают изотоничес­ким раствором хлорида натрия. В результате связывания флю­оресцирующей антиглобулиновой сыворотки с фиксированны­ми на антигене специфическими антителами образуются све­тящиеся комплексы антиген—антитело, которые обнаружива­ются при люминесцентной микроскопии.


Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 2921 | Нарушение авторских прав







При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.003 сек.)