АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Практическая часть занятия. Под амилазной активностью мочи понимают количество субстрата (крахмала), расщепляемого I мл мочи за определенный промежуток времени (например

Лабораторная работа. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИЛАЗНОЙ АКТИВНОСТИ МОЧИ

Под амилазной активностью мочи понимают количество субстрата (крахмала), расщепляемого I мл мочи за определенный промежуток времени (например, 15 мин.) при 45⁰. Подразумевается, что в моче в качестве патологического компонента содержится фермент амилаза, попадающий в кровь при заболеваниях поджелудочной железы.

Принцип метода: Определение основано на нахождении максимального разведения мочи, при котором амилаза мочи еще расщепляет крахмал, т.е. в пробирке нет синего оттенка при добавление йода (образовавшиеся декстрины дадут красно - бурый цвет, желтый цвет, свидетельствующий об отсутствии крахмала). Учитывая разведение, следует рассчитывать количество крахмала, которое гидролизует 1 мл неразведенной мочи.

Ход определения: Берут 10 пронумерованных пробирок, наливают в каждую по 1 мл физиологического (0,85%) раствора хлористого натрия. Затем в 1-ую пробирку приливают 1 мл исследуемой мочи, перемешивают и промывают пипетку 5-6 кратным набором раствора из пробирки, далее 1 мл смеси переносят во 2 пробирку, перемешивают и вновь промывают пипетку и т.д. Таким образом получают разведение мочи в 2, 4, 8, 16 (и далее в геометрической прогрессии) раз.

В каждую пробирку наливают по 1 мл физиологического раствора (активатор амилазы мочи, очень слабый по своей активности) и по 2 мл 0,1% крахмала, тщательно перемешивают и все пробирки ставят на 15 минут в термостат при температуре 45⁰. После инкубации пробирки охлаждают, добавляют по 2 капли раствора йода. Для расчета берут пробирку с наибольшим разведением мочи, где нет синего оттенка, т.е. пробирку, где произошло расщепление крахмала.

Расчет разберем на конкретном примере:

1. допустим, что

расщепление крахмала произошло в 4 пробирке, где моча разведена в 16 раз, т.е

2 мл 1/16 мл мочи расщепляет -------2 мл 0,1% раствора крахмала

1 мл мочи ------------------------- ----Х мл 0,1% раствора крахмала,

отсюда:

Х = 2 х 16 =32 мл

Результат записывается так: d 45⁰/15 = 32ед., где d - диастаза мочи (амилаза). В норме она равна 16 - 64 ед. Количество амилазы в моче повышается при панкреатите, заболевании желчных путей и т.д. При почечной недостаточности амилаза в моче отсутствует.

Результат:

Вывод:

Задачи для решения студентами:

1. При остром панкреатите происходит внутриклеточная активация трипсиногена и химотрипсиногена, в результате чего происходит разрушение тканей поджелудочной железы. Такие лечебные препараты как трасилол, контрикал, гордокс являются структурными аналогами субстратов этих ферментов. На чем основано лечебное действие этих препаратов?

Примерный ответ: так как указанные препараты являются структурными аналогами субстратов, то их применяют в качестве конкурентных ингибиторов

2.Больной с переломом костей голени поступил в травматологическое отделение больницы. Определение активности какого фермента следует провести?

Примерный ответ: при переломе кости (деструкция ткани) происходит поступление в кровь внутриклеточных ферментов, в частности щелочной фосфатазы, которая является маркером при переломах костей.

3.На клинической консультации обсуждаются анализы мочи больного панкреатитом и больного с опухолью почек. У первого больного в моче обнаружена амилаза, а у второго – трансаминаза. Почему нарастание амилазы мочи может указывать на внепочечный характер заболевания (панкреатит), а подъем на поражение почек (рак)?

Примерный ответ: появление в крови внутриклеточного фермента панкреатической железы - амилазы свидетельствует о панкреатите, тогда как трансаминазы являются маркерами на поражение различных внутренних органов (печени, сердца, почек)

4.Гомогенат печени кролика содержит фермент сукцинатдегидрогеназу (СДГ); его инкубировали с субстратом (янтарной кислотой) в присутствии малоновой кислоты. Изменится ли активность СДГ? Каким образом:

а) при увеличении концентрации малоновой кислоты;

б) при увеличении концентрации янтарной кислоты?

Примерный ответ: а) малоновая кислота является структурным аналогом сукцината, будет ингибировать реакцию СДГ по механизму конкурентного ингибирования

Б) увеличение концентрации янтарной кислоты вытеснит из активного центра фермента ингибитор и активность СДГ повысится (при ответе предлагается студенту написать реакцию, катализируемую СДГ, а также структуру малоната).

5. Каков механизм действия сульфаниламидных препаратов, ингибирующих рост патогенных бактерий, нуждающихся в парааминобензойной кислоте?

Примерный ответ: механизм конкурентного ингибирования (при ответе предлагается студенту написать структуру ПАБК и сульфаниламида)

Дайте ответы на следующие вопросы:

1. Назовите ферменты, которые используются в клинике в лечебных целях. Укажите, при каких патологических состояниях используются такие ферменты как пепсин, гиалуронидаза, нуклеазы. Каковы причины применения ферментов с лечебной целью?

Примерный ответ: пепсин применяют при недостаточной секреции этого фермента слизистой желудка, гиалуронидазу – при заболеваниях, сопровождающих рост соединительной ткани - для рассасывания послеоперационных рубцов, рубцов после термических ожогов, артритах, гематомах, так как гиалуронидаза способствует разрушению соединительной ткани; нуклеазы применяют для лечения хронических гнойных и воспалительных процессов, они снижают вязкость гнойного содержимого, обладаеют противовоспалительным действием, при конъюнктивитах и др.

2. Приведите примеры, демонстрирующие диагностическое значение определения активности ферментов (трансаминаз, альфа - амилаза, кислой и щелочной фосфатаз, изоферментов ЛДГ) в крови.

Примерный ответ: трансаминазы определяют при инфрктах (АСТ) и гепатитах (АЛТ), амилазу – при панкреатитах, кислую фосфатазу при простатитах, щелочную при повреждениях костной ткани, так как они являются органоспецифичными.

Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 652 | Нарушение авторских прав