АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Дополнительно: подсчет эффективности трансформации

1. Определите общее число трансформированных клеток

Предполагается, что каждая колония на чашке произошла из отдельной клетки. По мере того, как клетки делятся, их становится все больше и больше, и она образуют колонию. Самый прямой способ подсчитать общее количество клеток, которые получили плазмиду и выжили - это подсчитать число колоний на чашке.

Введите число здесь

1. Определите количество плазмидной ДНК, добавленной в клетки, нанесенные на чашку LB/amp/ara

Чтобы определить количество ДНК в расчете на одну чашку, нам надо знать две вещи: какое количество ДНК исходно было взято в эксперимент, и какая доля всей ДНК попала на одну чашку.

Когда вы определите эти числа, вы умножите общее количество ДНК на долю ДНК, приходящуюся на одну чашку и получите количество ДНК в расчете на одну чашку LB/amp/ara

А. Определение количества ДНК

Общее количество ДНК, которое мы использовали, равняется произведению концентрации ДНК и взятого объема, т.е:

ДНК (мкг) = (концентрация ДНК, мкг/мкл) x (объем в мкл)

В этой работе вы использовали 10 мкл раствора плазмиды с концентрацией 0.08 мкг/мкл. Это означает, что в каждом микролитре раствора содержалось 0.08 мкг ДНК. Рассчитайте общее количество ДНК, которое было использовано в эксперименте

Введите число здесь

Как вы используете это число? Вы должны умножить его на долю ДНК, приходящуюся на одну чашку, для того, чтобы узнать количество ДНК (в мкг), приходящееся на одну чашку.

Б. Определение доли плазмидной ДНК, которая была нанесена на чашку

Теперь вам надо понять, какую часть от всей ДНК вы нанесли на одну чашку. Чтобы это узнать, разделите объем, нанесенный вами на чашку, на весь объем, содержавшийся в пробирке:

Доля ДНК=

На одну чашку вы взяли 100 мкл суспензии из пробирки, содержавшей 510 мкл жидкости. Почему 510? Если вы не помните, посмотрите внимательно экспериментальный протокол и отметьте все шаги, на которых вы добавляли жидкость в пробирку. Рассчитайте долю ДНК, приходящуюся на одну чашку.

Введите число здесь

Как вы используете эту информацию?

Дата добавления: 2015-10-11 | Просмотры: 649 | Нарушение авторских прав