АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Лабораторный протокол в картинках

Прочитайте:
  1. A.1.7 Список та контактна інформація осіб, які брали участь в розробці протоколу.
  2. II. Протоколы дифференцированной диагностической и лечебной тактики в неспециализированном хирургическом стационаре.
  3. III. ОРГАНИЗАЦИОННЫЕ АСПЕКТЫ ВНЕДРЕНИЯ ПРОТОКОЛА
  4. III. Протоколы обследования и дифференцированной хирургической тактики
  5. IV. Протокол
  6. LXXV. ПРОТОКОЛЪТ
  7. V. Пологи (відповідно до клінічного протоколу «Фізіологічні пологи»).
  8. XVIII. Протокол
  9. А.4. Ресурсне забезпечення виконання протоколу
  10. А.4. Ресурсне забезпечення виконання протоколу

 

 

  1. Возьмите две закрытые микроцентрифужные пробирки. Напишите на одной микроцентрифужной пробирке +pGLO, на другой –pGLO, а также ваш класс и фамилию. Поставьте пробирки в штатив.

 

  1. Откройте пробирки и чистой одноразовой пипеткой добавьте по 250 мкл раствора для трансформации (CaCl2) в каждую пробирку.

 

 

 

  1. Поставьте пробирки в крошеный лед или снег (не используйте лед кубиками)

 

 

  1. С помощью стерильной петли, возьмите одну колонию с вашей «стартовой» чашки. Возьмите пробирку «+pGLO» и погрузите петлю в трансформационный раствор на дне пробирки. Покрутите петлю между большим и указательным пальцами, чтобы вся колония равномерно размешалась в буфере (без плавающих комков). Поставьте пробирку обратно на лед. Возьмите новую петлю и повторите процедуру для пробирки «-pGLO»
  2. Рассмотрите раствор плазмиды pGLO под ультрафиолетом. Запишите ваши наблюдения. Окуните новую стерильную петлю в раствор плазмиды. Выньте петлю. На кольце должна быть натянута пленка плазмиды (как пленка мыльного раствора на кольце, когда вы выдуваете пузыри). Помешайте петлей суспензию клеток в пробирке «+pGLO». (если у вас есть микропипетка, добавьте 10 мкл раствора плазмиды микропипеткой и перемешайте). Закройте пробирку и верните ее обратно на лед. Не добавляйте ДНК в пробирку «-pGLO». Почему туда не надо добавлять ДНК?

 

  1. Держите пробирки на льду в течение 10 минут. Убедитесь в том, что вы засунули пробирки достаточно глубоко в штатив, так что их нижняя часть погружена в лед.

 

  1. Пока пробирки стоят на льду, подпишите ваши четыре чашки на нижней стороне (не на крышке) как показано на картинке.

 

  1. Тепловой шок. Возьмите штатив с пробирками и быстро перенесите его изо льда на нагретую до 42ºС водяную баню РОВНО на 50 секунд. Убедитесь, что пробирки погружены в воду. Как только 50 секунд пройдут, поставьте штатив обратно на лед. Для хороших результатов важно быстро переместить пробирки изо льда (0ºС) на водяную баню (42ºС) и потом обратно на лед (0ºС). Подержите пробирки на льду две минуты.

 

  1. Снимите штатив со льда и поставьте на стол. Откройте первую пробирку, возьмите чистую стерильную пипетку и добавьте 250 мкл питательной среды LB в пробирку. Снова закройте ее. Повторите процедуру для второй пробирки, обязательно взяв новую стерильную пипетку. Перемешайте суспензию и оставьте на 10 мин на столе.

 

  1. Легко встряхните пробирки пальцем, чтобы перемешать. Нанесите по 100 мкл суспензии из каждой на чашки, в соответствии с рисунком. Используйте новую стерильную пипетку для каждой пробирки.

 

  1. Быстро размажьте суспензию по поверхности чашки с помощью стерильной петли. Используйте новую стерильную петлю для каждой чашки.

 

  1. Сложите ваши чашки в стопку и склейте вместе скотчем. Напишите на дне нижней чашки ваши фамилии и класс, переверните стопку, и поставьте в термостат/оставьте на столе.

 

Ответы на вопросы

 

 

Вопросы к уроку 1

 

  1. Чтобы генетически трансформировать целый организм, вы должны вставить новый ген (гены) в каждую клетку этого организма. Какой организм лучше подойдет для полной трансформации – многоклеточный или одноклеточный?

 


Дата добавления: 2015-10-11 | Просмотры: 572 | Нарушение авторских прав







При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.003 сек.)