АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Система pGLO

В этой работе ваши ученики с помощью простой процедуры трансформируют бактерий геном, кодирующим зеленый флуоресцентный белок (GFP). В природе этот ген принадлежит медузе Aequorea victoria; GFP дает ей возможность флуоресцировать и светиться в темноте. После трансформации бактерии начинают экспрессировать полученный от медузы ген и производить GFP, в результате чего приобретают возможность светиться ярко-зеленым светом под ультрафиолетом.

Ученики познакомятся с процессом переноса генов из одного организма в другой с помощью плазмид. В дополнение к своей хромосомной ДНК, бактерии часто содержат одну или несколько маленьких кольцевых молекул ДНК, называемых плазмидами. Обычно плазмиды содержат гены, тем или иным образом способствующие выживанию бактерий. Бактерии передают плазмиды, содержащие эти гены, друг другу, что позволяет им быстро приспосабливаться к новым условиям. Например, широкое распространение устойчивости к антибиотикам в последнее время во многом связано с перемещением плазмид.

Плазмида pGLO содержит ген GFP и ген устойчивости к антибиотику ампициллину. Также эта плазмида содержит специальную систему регуляции работы генов, с помощью которой можно контролировать экспрессию белка в трансформированных клетках (подробно описана в приложении D). Чтобы «включить» ген GFP, нужно всего лишь добавить сахар арабинозу в питательную среду, на которой растут клетки. Отбор бактерий, получивших ДНК pGLO, ведется с помощью высевания на среду, содержающую антибиотик – ампициллин. Трансформированные клетки вырастают в виде белых колоний на чашках, не содержащих арабинозу, и в виде зеленых – на чашках, где в среду была добавлена арабиноза. За всем процессом можно наблюдать своими глазами с помощью УФ-лампы или УФ-ручки, находящейся в составе этого набора.

Для того, чтобы эта работа принесла наибольшую пользу вашим ученикам, они должны знать, что такое ген и понимать взаимосвязь между генами и белками. Более подробное обсуждение этой и других основных концепций молекулярной биологии вы сможете найти в приложении B.

Данная работа по трансформации может быть продолжена работой по выделению зеленого флуоресцентного белка. Для проведения последней, необходимо сначала провести трансформацию.

Контрольный список(ü) содержания набора

В этом разделе перечислены все компоненты, входящие в состав набора по трансформации бактерий и требуемые дополнительные принадлежности. Каждый набор рассчитан на восемь рабочих мест для учеников. Проверьте с помощью этого списка, все ли у вас есть, перед тем как начать работу.

*При комнатной температуре для выращивания клеток на чашках потребуется больше времени

**В качестве альтернативы можно налить горячей воды в пенопластовую коробку и остудить воду до 42ºС

План уроков

Каждая из трех частей работы может быть выполнена за 50 минут. Подробный лабораторный протокол можно найти в руководстве для учеников.

Дата добавления: 2015-10-11 | Просмотры: 739 | Нарушение авторских прав