АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Методы специфического окрашивания.

Прочитайте:
  1. A. Предмет и методы отрасли
  2. Bystander-effect. Методы обнаружения. Биологическая роль.
  3. I. Методы симптоматической психотерапии
  4. II МЕТОДЫ, ПОДХОДЫ И ПРОЦЕДУРЫ ДИАГНОСТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ
  5. II. МЕТОДЫ ОПЕРАЦИЙ И МЕТОДИКА ОБСЛЕДОВАНИЯ И ЛЕЧЕНИЯ В ХИРУРГИИ КИСТИ
  6. III. ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ ИНСТРУМЕНТАЛЬНЫЕ И ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
  7. V.I.V. Функциональные методы исследования и консультации специалистов
  8. V2: Анатомо-физиологические особенности органов и систем, методы обследования.
  9. V2: Анатомо-физиологические особенности органов и систем, методы обследования.
  10. V2: Анатомо-физиологические особенности органов и систем, методы обследования.

Основным методом специфического выявления дезоксирибонуклеиновых кислот считается реакция Фельгена. Она основана на кислотном гидролизе нуклеиновой кислоты, при котором от дезоксирибозофосфата отщепляются сначала пурины, затем - пиримидины и в результате освобождаются реакционноспособные альдегидные группы. Оптимальное время гидролиза варьируется в зависимости от объекта изучения и метода фиксации.

Реакция ядерного материала после предварительного гидролиза осуществляется с реактивом Шиффа (фуксинсернистая кислота). Приготовление реактива Шиффа: растворяют 1 г основного фуксина в 100 мл дистиллированной воды, нагретой до кипения, и дают раствору остыть до 60о. Затем его фильтруют и добавляют 2 г бисульфата или метабисульфата натрия или калия и 20 мл 1н. HCl. Полученную смесь выдерживают в закрытой посуде в темноте при комнатной температуре 18-24 ч, после чего добавляют 300 мг активированного древесного угля, энергично встряхивая в течение 1 мин, и фильтруют. Полученный раствор должен быть прозрачным светло-желтого цвета. Хранят его в хорошо закрытой посуде, обернутой черной бумагой, в холодильнике. Раствор становится непригодным, когда появляется розовая окраска.

Реакция Фельгена (модификация по Р.Лили). Эта методика дает хорошие результаты для материала, фиксированного в жидкости Карнуа и формалине. Депарафинироованные срезы споласкивают в дистиллированной воде, затем помещают в предварительно нагретую до 56-60о 1 н. HCl и выдерживают при этой температуре 10-15 мин. Погружают стекла в реактив Шиффа на 10 мин. Стаканчик с реактивом должен быть обернут черной бумагой. Последовательно промывают в трех сменах (1, 2 и 2 мин) сернистой воды. Затем промывают 5 мин в проточной воде, докрашивают в течение нескольких секунд в 0,01%-м спиртовом растворе прочного зеленого (эту стадию можно опустить), обезвоживают и заключают в канадский бальзам. Результаты окраски: ядерный хроматин окрашивается в темный пурпурно-красный цвет.

Метиловый-зеленый-пиронин. Этот метод специфически дифференцирует ДНК (зеленый цвет) и РНК (красный цвет). Лучшие результаты после фиксации в жидкости Карнуа, ФСУ или абсолютном спирте. Состав красителя по Унна: метиловый зеленый - 0,15 г; пиронин - 0,25 г; 96о-й спирт - 2,5 мл; глицерин - 20 мл; 0,5%-й водный раствор карболовой кислоты - 100 мл. Депарафинированные срезы доводят до воды и окрашивают в течение 20 мин. Промывают охлажденной дистиллированной водой (лучше свежеперегнанной), быстро обезвоживают ацетоном, просветляют смесью ацетон-ксилол (1:1), и через 2 смены ксилола заключают в канадский бальзам. Результаты окраски: ядра - голубовато- -зеленые; ядрышки - красные; цитоплазма - от розового до красного.

Метод Шабадаша (реакция на гликоген). Поскольку гликоген не растворим в крепких спиртах, для его фиксации пользуются спиртовыми растворами. Часто применяют фиксатор Карнуа или спирт-формол. Метод Шабадаша основан на том, что периодат калия или натрия при воздействии на полисахариды окисляет спиртовые группы, превращая их в альдегидные, которые, реагируя с фуксинсернистой кислотой, дают красно-фиолетовое окрашивание соответствующих включений. Депарафинированные срезы промывают в 2 сменах дистиллированной воды и помещают на 10-15 мин в 0,01 М раствор периодата калия или натрия. Этот раствор следует готовить заранее, учитывая, что периодаты плохо растворяются в воде. Хранят его в темной посуде. Стекла со срезами промывают в 3 сменах дистиллированной воды (по 3 мин) и помещают на 20-25 мин в реактив Шиффа, который также хранится в темной посуде. Затем промывают в 3 сменах сернистой воды (по 3 мин), споласкивают дистиллированной водой, обезвоживают и заключают в канадский бальзам. При необходимости можно докрасить ядра гематоксилином.

Задание:

1. Заполните таблицу, перечислив основные группы красителей.

Таблица 3

Основные группы красителей

Тип красителя Методика окрашивания Окрашиваемые структуры
     

 

2. Рассмотрите микропрепараты, окрашенные различными красителями. Зарисуйте и подпишите.

Название препарата Тип окраски
Окраска гематоксилином
1.   Поперечно-полосатая мышечная ткань языка. Окраска гематоксилином-эозином.  
2.   Поперечно-полосатая мышечная ткань языка. Окраска железным гематоксилином по Гейденгайну
Специфические окраски
3. Жировая ткань. Окраска Суданом - III.
4. Печень. Окраска по Шабадашу на гликоген.
5. Сосуд эластического типа. Окраска арсеином на эластические волокна.
6.   Кость. Окраска по Шморлю карболовым фуксином с дифференцировкой карбонатом лития.
7.   Астроцитная глия. Импрегнация серебром элементов нервной ткани.
8. Реакция на ДНК, мукоиды. Окраска реактивом Шиффа.
9. Хроматофильная субстанция в нейронах. Окраска по Лёфлеру метиленовой синью.
10. Гипофиз (демонстрационный препарат). Окраска по Маллори.

 

 


Дата добавления: 2015-12-15 | Просмотры: 1467 | Нарушение авторских прав







При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.004 сек.)