АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Практическая часть

Клетки микроорганизмов измеряют под микроскопом с по­мощью окулярной линейки — микрометра или окулярного винто­вого микрометра. Для измерения лучше использовать живые, а не фиксированные клетки, так как фиксация и окраска клеток при­водят к некоторому изменению их истинных размеров. Удобно оп­ределять размеры клетки, пользуясь фазово-контрастным устрой­ством. Если клетки подвижны, препарат слегка подогревают или к капле исследуемой суспензии добавляют каплю 0,1%-ного водного раствора агара. Размеры клеток выражают в микрометрах (мкм). Один микро­метр равен 1000 нанометров (нм). В нанометрах выражают размеры отдельных компонентов бактерий.

Окулярный микрометр представляет собой круглую стеклянную пластинку, в центре которой выгравирована линейка длиной 5 мм. Линейка разделена на 50 частей. Окулярный микро­метр вставляют в окуляр. Для этого вывинчивают глазную линзу окуляра, помещают на его диафрагму окулярный микрометр де­лениями вниз и завинчивают линзу. Однако делениями окуляр-микрометра нельзя непосредственно измерить величину клетки, так как последние рассматриваются через объектив и окуляр, а деления линейки — только через верхнюю линзу окуляра. Поэто­му, прежде чем приступить к измерению величины клеток, необ­ходимо определить цену деления окулярного микрометра для дан­ного увеличения микроскопа, что делают с помощью объективно­го микрометра.

Рис. 5. Объективный микрометр а — общий вид, б — вид под мик­роскопом

Объективный микрометр (рис. 5) — это металли­ческая пластинка с отверстием в центре. В отверстие вставлено стекло, на которое нанесена линейка длиной 1 мм. Она разделена на 100 частей, т. е. деление объективного микрометра соответст­вует 0,01 мм, или 10 мкм. Для определения цены делений окуляр­ного микрометра объективный микрометр помещают на столик микроскопа и фокусируют при малом увеличении. Изображение линейки перемещают в центр поля зрения и только после этого меняют объектив на тот, при ко­тором будут определяться раз­меры клеток. Перемещая столик микроскопа и поворачивая оку­ляр, устанавливают микрометры так, чтобы их шкалы были па­раллельны и одна перекрывала другую. Цену деления окуляр­ного микрометра определяют по принципу нониуса, т. е. совме­щают одно из делений шкалы окулярного и объективного микрометров и находят следую­щее их совмещение (рис. 6).

Рис 6. Определение це­ны деления объективного микрометра: 1 - деление объективно­го микрометра; 2 - де­ление окулярного микро­метра

Устанавливают, скольким деле­ниям объективного микрометра соответствует 1 деление окулярного микрометра. Например, 2 деления объект-микрометра (20 мкм) соответст­вуют 5 делениям окуляр-микрометра, следовательно, 1 деление окуляр-микрометра равняется 4 мкм (20:5). Если те­перь на столик микроскопа положить препарат с клетками микроорганизмов и рассматривать его при том же увеличе­нии, то можно измерить величину клетки. Для этого определяют, какому числу делений окулярной линейки соответст­вует величина измеряемого объекта, и умножают это число на цену деления окулярного микрометра.

Удобно определять размеры клеток с помощью винтового окулярного микрометра MOB-1-15. Винтовой окулярный микрометр закрепляют на тубусе микроскопа, предварительно вынув окуляр. В окуляре винтового микрометра имеется неподвиж­ная шкала с ценой деления 1 мм для определения размеров крупных объектов и подвижная стеклянная пластинка с перекрес­тием. Пластинка связана с микрометрическим винтом-барабаном и перемещается вместе с перекрестием при его вращении. Для из­мерения длины клетки вращением микрометрического винта-бара­бана окулярного микрометра подводят перекрестие к концу клетки и отмечают деление на барабане. Затем, вращая барабан, пере­мещают перекрестие до другого конца клетки и вновь отмечают деление на барабане. Определяют, скольким делениям микромет­рического винта-барабана соответствует длина клетки, и умножа­ют полученное значение на цену деления барабана при данном увеличении микроскопа.

Цену деления барабана для каждого объектива определяют с помощью объективного микрометра. С этой целью подводят пере­крестие к началу одного деления объективного микрометра и от­мечают деление на барабане. Затем, вращая барабан, перемеща­ют перекрестие до конца деления объективного микрометра и вновь отмечают деление на барабане. Определяют, скольким де­лениям микрометрического винта-барабана соответствует 1 деле­ние объективного микрометра. Например, 1 деление объективного микрометра, т. е. 10 мкм, соответствует X делениям микрометри­ческого винта-барабана, следовательно, 1 деление его при данном увеличении микроскопа равно 10: Х мкм.

Чтобы результаты были достоверными, необходимо измерить не менее 20—30 клеток. При определении размеров округлых форм измеряют диаметр клеток, у других форм — длину и шири­ну, указывают средние размеры клеток и пределы колебаний, т.е. минимальные и максимальные размеры.

Контрольные вопросы

1. Укажите, в каких размерных границах находятся микроорганизмы. Какие единицы измерения используют в данном случае?

2. Какие приспособления используют для определения размеров микроорганизмов?

3. Что такое окуляр-микрометр?

4. Что такое объект-микрометр?

5. Как определить цену деления?

Дата добавления: 2015-12-16 | Просмотры: 589 | Нарушение авторских прав