АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Практическая часть. Существует несколько способов окраски жгутиков

Существует несколько способов окраски жгутиков. Все они ос­нованы на использовании различных протрав, осаждающихся на поверхности жгутиков, благодаря чему диаметр жгутиков увели­чивается и они становятся видимыми в световом микроскопе. Ок­раска жгутиков требует тщательной подготовки клеток и аккуратности в работе, так как жгутики легко обламываются даже при легком взбалтывании суспензии.

Окраска жгутиков по методу Леффлера в модификации Пешкова. Бактерии, предназначенные для окраски жгутиков, ежедневно в течение 2—3 дней пересевают в свежую жидкую или на плотную среду, содержащую не более 1,5% агара. Для окраски жгутиков используют клетки 12—16-ча­совой культуры. Клетки осторожно берут петлей и переносят в пробирку со стерильной водой, подогретой до температуры, при которой их выращивали. Прежде чем делать мазок, каплю полу­ченной суспензии просматривают под микроскопом и убеждаются в том, что клетки подвижны и плотность суспензии невелика — 5—10 клеток в поле зрения.

Клетки легко теряют жгутики в момент приготовления мазка, поэтому необходимо обращать внимание на чистоту стекла и спо­соб нанесения на него суспензии. Предметные стекла должны быть тщательно обезжирены. Непосредственно перед приготовле­нием мазка стекло 3—4 раза проводят через наиболее горячую часть пламени горелки. Дают стеклу остыть и пастеровской пи­петкой или петлей наносят 3—4 маленькие капли на стекло. Кап­ли должны хорошо расплываться по стеклу и быстро высыхать. Высушенный мазок заливают протравой. Необходимо следить, чтобы протрава не подсыхала. Через 15 мин протраву смывают дистиллированной водой и препарат окрашивают в течение 5 мин разбавленным фуксином Циля, погружая его мазком вниз в раст­вор красителя. Затем препарат промывают водой, высушивают на воздухе и исследуют с иммерсионной системой. Обращают внимание на расположение жгутиков, их количество и длину.

По методу Рыжковой препарат заливают протравой через во­ронку с фильтром и трижды в течение 3—5 мин подносят стекло к пламени горелки до появления паров. Затем протраву сливают ипрепарат заливают через воронку с фильтром раствором Циля на 5—10 мин.

Окраска жгутиков по способу Фонтана. Для окраски жгутиков используют клетки 12—16-часовой культуры, выращенной на скошенной агаризованной среде с конденсацион­ной водой. Культуру вынимают из термостата и оставляют на 1 ч при комнатной температуре. В пробирку с 0,5 мл водопроводной стерильной воды вносят клетки, взятые на границе с конденсаци­онной водой. Материал берут осторожно, следует только коснуть­ся бактериологической петлей поверхности культуры. Петлю с бактериальной массой оставляют в воде на 1 ч. За это время подвижные бактерии окажутся свободно взвешенными в воде. За­тем петлю вынимают, прокаливают, охлаждают и только после этого ею берут капли взвеси бактерий и осторожно наносят их на обезжиренное стекло. Нанесенные капли не размазывают, они должны быстро высохнуть, лучше в термостате. Мазки фиксиру­ют 5 мин жидкостью Руге. Препарат промывают водой, заливают протравой и подогревают стекло до появления паров в течение 2 мин. Протраву сливают и препарат тщательно промывают во­дой. Далее обработку препарата проводят серебрением. Разбав­ленный аммиачный раствор серебра наливают на мазок и стекло несколько раз осторожно подогревают в течение 2 мин до появ­ления паров. Препарат промывают водой, высушивают и микро­скопируют с иммерсионной системой. Бактерии в препарате окра­шены в черный или темно-коричневый цвет, а жгутики, часто спу­танные, — в светло-коричневый или желтый.

Контрольные вопросы

1. Что такое жгутик? Перечислите типы жгутикования;

2. Расскажите о строении жгутика;

3. Объясните процесс сборки жгутика;

4. В чем отличия в организации жгутиков у грамотрицательных и грамположительных прокариот?

5. Раскройте сущность методов выявления жгутиков бактерий.

Дата добавления: 2015-12-16 | Просмотры: 506 | Нарушение авторских прав