АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология
|
Практическая часть. Тонкую структуру клеточной стенки хорошо видно лишь в электронном микроскопе
Тонкую структуру клеточной стенки хорошо видно лишь в электронном микроскопе. Для наблюдения клеточной стенки в световом микроскопе применяют метод темного поля либо специальную окраску, с помощью которой удается легко выявить границы между отдельными клетками, расположенными в виде длинных нитей или плотных агрегатов. На обезжиренном стекле делают мазок клеток исследуемых бактерий, высушивают его на воздухе и фиксируют в течение 5 мин 5%-ным раствором фосфоромолибденовой кислоты. Затем препарат промывают водой и окрашивают не более 15 сек 0,02%-ным раствором кристаллвиолета. Снова промывают водой, высушивают и микроскопируют с иммерсионной системой. Клеточная стенка окрашивается в черный, а цитоплазма — в бледно-сиреневый цвет.
Можно использовать метод окраски клеточной стенки по Гутштейну. Мазок выдерживают 15 мин в жидкости Карнуа, протравляют в течение 25 мин 10%-ным водным раствором таннина промывают водой и окрашивают водным фуксином или 0,02%-ньш раствором кристаллического фиолетового в течение 30—60 с. Затем препарат промывают, высушивают и микроскопируют с иммерсией.
Окраска по Граму. С молекулярной организацией и химическим составом клеточной стенки связывают способность бактерий окрашиваться по Граму. Эта окраска является важным диагностическим признаком, она коррелирует со многими другими свойствами бактерий. По способности окрашиваться красителями, триметилфенолового ряда все бактерии делятся на две группы: грамположительные и грамотрицательные. Грамположительные бактерий удерживают комплекс генцианового фиолетового с йодом, при обработке препарата спиртом и поэтому окрашиваются в фиолетовый цвет. Грамотрицательные бактерии не обладают такой способностью и обесцвечиваются спиртом. При последующей обработке фуксином или сафранином они приобретают розовую окраску. Как правило, по Граму окрашивают клетки молодых, чаще всего суточных, культур, так как способность удерживать краситель зависит от физиологического состояния бактерий. Например, некоторые бактерии после прекращения активного роста теряют способность окрашиваться по Граму.
Окраска по Граму заключается в следующем. На одном обезжиренном стекле делают мазки разных микроорганизмов: в центре— мазок клеток исследуемой культуры, слева и справа — контрольных культур. Клетки одной контрольной культуры должны быть грамположительными (например, Micrococcus luteus или Bacillus cereus), другой — грамотрицательными (например, Escherichia coli). Мазки следует готовить тонкими, чтобы клетки равномерно распределялись по поверхности стекла и не образовывали скоплений. Препарат высушивают на воздухе, фиксируют над пламенем горелки и окрашивают в течение 1—2 мин карболовым генциановым или кристаллическим фиолетовым. Затем краситель сливают и, не промывая мазок водой, обрабатывают его 1—2 мин раствором Люголя до почернения. Сливают раствор Люголя, препарат обесцвечивают 0,5—1,0 мин 96%-ным этиловым спиртом, быстро промывают водой и дополнительно окрашивают 1—2 мин водным фуксином. Краситель сливают, препарат промывают водой, высушивают и микроскопируют с иммерсионной системой. При правильном окрашивании грамположительные бактерии имеют сине-фиолетовый, грамотрицательные — розово-красный цвет.
Контрольные вопросы
1. Что такое клеточная стенка?
2. В чем различия в клеточных стенках грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов?
3. Приведите примеры прокариот без клеточной стенки, с необычными клеточными стенками;
4. Перечислите методы изучения клеточной стенки бактерий;
5. В чем заключается суть окраски по Граму?
Дата добавления: 2015-12-16 | Просмотры: 478 | Нарушение авторских прав
|