Инструкция по применению набора реагентов для скрининга фенилкетонурии (ФКУ) у новорожденных в сухих пятнах крови.
День
Определение фенилаланина (ФА) в сухих пятнах крови.
Инструкция по применению набора реагентов для скрининга фенилкетонурии (ФКУ) у новорожденных в сухих пятнах крови.
Назначение: набор предназначен для скрининга ФКУ у новорожденных путем определения уровня ФА в сухих пятнах крови.
Реагенты:
1. реакционный буфер;
2. дипептид;
3. медный реагент;
4. калибровочные пробы;
5. контрольные пробы;
6. планшеты.
Принцип: флуоресцентный
Ход исследования:
1. приготовление рабочего раствора медного реагента:
· в колбу на 500 мл ввести медный концентрат;
· добавить 270 мл дистиллированной воды;
· охладить при t +2 +8 не менее 2 ч;
2. приготовление раствора дипептида:
· во флакон с дипептидом 7 мг добавить 1,4 мл дистиллированной воды;
· размешать;
3. приготовление инкубационной смеси:
· в 10 мл реакционного буфера добавить 0,65 мл дипептида;
· перемешать;
4. в планшет выбиваются стандартные, контрольные, исследуемые образцы;
5. во все лунки планшета внести по 50 мкл 80% этилового спирта:
6. планшет закрывается крышкой и инкубируется при комнатной температуре втечение 30 мин при режиме встряхивания «5-6»;
7. вынуть из каждой лунки диски инъекционной иглой;
8. во все лунки внести по 50 мкл инкубационной смеси;
9. планшет закрывают крышкой и инкубируют при комнатной температуре 1 мин в режиме «5-6»;
10. инкубируют в термостате при +60 1час 20 мин;
11. охладить открытый планшет в морозильной камере при -12 -18 в течение 5 мин;
12. внести по 200 мкл холодного раствора медного реагента;
13. инкубация при комнатной температуре 10-15 мин в режиме «5-6»;
14. счет на анализаторе с измерением флюоресценции;
Нормы: 0,1 – 3,0 мг%
с ФКУ 4 – 8 мг%
Интерпретация результатов:
Обнаружение новорожденных с ФКУ основано на использовании величины предварительно принятой пороговой концентрации ФА, которая устанавливается эмпирически, зная разброс нормальных значений в популяции.
Общепринятым для скрининговых медико-генетических центров в РФ является использование в качестве пороговой концентрации ФА 122 мкмоль/л. Это значение пригодно для оценки уровня ФА в сухих пятнах крови, взятой на 4 – 5 сут после рождения (при преждевременных родах – на 7 – 14 сут жизни).
Концентрация ФА в пробе, превышающая пороговое значение, указывает на возможную патологию, требующую дополнительного лабораторного определения. Все образцы с концентрацией выше 122 мкмоль/л должны быть проверены повторно для исключения ложноположительных результатов. Концентрация ФА в сухих пятнах крови менее 30 мкмоль/л может указывать на недостаточность пропитки крови исследуемого образца.
В случае повторного обнаружения в том же образце крови концентрации ФА выше пороговой скрининг-лаборатория уведомляет поликлинику по месту проживания новорожденного о необходимости повторного взятия крови для количественного определения уровня ФА.
Забор крови производится на бланк, исследованию подвергаются высушенные пятна крови.
Пороговый уровень ФА подвержен колебаниям и устанавливается отдельно для каждой скрининговой лаборатории.
День
Дата добавления: 2015-12-16 | Просмотры: 596 | Нарушение авторских прав
|