АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Выделение вирусов в культурах клеток

Прочитайте:
  1. B) гибридных клеток и выращивания из них гибридов
  2. I. Культуры клеток.
  3. Анализ сцепления у человека: гибридизация клеток и ДНК-технология
  4. Б) в первичных культурах клеток
  5. Б) Пролиферация незрелых клеток миелоидного ряда,
  6. Биологические мембраны клеток
  7. В цитоплазме клеток головного мозга, поражённых вирусом, обнаружили включения - тельца Бабеша - Негри. Какой диагноз поставлен на основании этих данных?
  8. В) выделение вируса из слюны в/мозговым заражением белых мышей
  9. В. Развитие клеток иммунной системы
  10. Векторы на основе вирусов животных (ретровирусов, полиомавирусов) и их использование в генотерапии.

При выделении вирусов из различных инф. материалов от больного (кровь, моча, фекалии, слизистые, смывы из органов) применяют культуры кл, обладающие наибольшей чувствительностью к предполагаемому вирусу. Для заражения используют культуры с хорошо развитым монослоем кл. Перед заражением питат. среду удаляют и в каждую пробирку вносят по 0,1-0,2 мл взвеси испытуемого материала, предварительно обработанного а\б для уничтожения бактерий и грибов. После 30-60 мин. контакта вируса с монослоем кл.удаляют избыток материала, в культуру вносят поддерживающую среду и пробы оставляют в термостате до выявления признаков размножения вируса.

 

О размножении вируса в культуре клеток судят по следующим признакам: цитопатогенному действию (ЦПД); образованию в клетках включений; появлению бляшек; феномену гемадсорбции; цветной пробе.

Цитопатогенное действие может проявляться полной дегенерацией клеток – слущиванием клеток с поверхности стекла после их гибели (энтеровирусы полиомиелита, Коксаки); частичной дегенерацией – округлением клеток, слиянием и образованием симпластов (вирус кори).

Образование включений в клетках – это скопление вирионов или отдельных компонентов в цитоплазме или в ядре клеток, выявляемые под микроскопом при специальном окрашивании. Вирус натуральной оспы образует цитоплазматические включения – тельца гварниери, вирусы герпеса, аденовирусы – внутриядерные включения.

Появление бляшек – зоны клеток, разрушенных вирусом (негативные колонии вирусов), обнаруживают в клеточных культурах, растущих на стекле и покрытых тонким слоем агара. Бляшки различаются по величине, форме, времени появления, поэтому данный тест используют для дифференциации вирусов.

Реакция гемадсорбции заключается в способности клеток, зараженных вирусами, адсорбировать на своей поверхности эритроциты, потому что эти клетки несут на поверхности гемагглютинины вируса.

Цветная реакция основана на изменении цвета питательной среды с индикатором, используемой для культур клеток. При росте клеток, не пораженных вирусом, идет накопление продуктов метоболизма, которые изменяют цвет питательной среды. При репродукции вирусов в культуре нарушается метаболизм клеток, и среда сохраняет первоначальный цвет.

При отсутствии ЦПД можно поставить реакцию интерференйии – исследуемая культура повторно заражается вирусом, вызывающим ЦПД. В положительном случае ЦПД будет отсутствовать (реакция интерференции положительная), если в исследуемом материале вируса не было, наблюдается ЦПД.

Культивирование вирусов в курином эмбрионе: методы заражения, индикации и идентификации вирусов. Культивирование вирусов на лабораторных животных: методы заражения, индикации и идентификации вирусов.


Дата добавления: 2015-12-16 | Просмотры: 1118 | Нарушение авторских прав







При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.005 сек.)