АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Лабораторная диагностика. Вирусологический метод. Материал – фекалии, реже носоглоточный смыв, кровь, ликвор

Вирусологический метод. Материал – фекалии, реже носоглоточный смыв, кровь, ликвор. Материал фильтруют, обрабатывают антибиотиком, вносят в культуру клеток Hep-2 и RD (из рабдомиосаркомы человека). Через 5-7 дней возникает ЦПД в виде мелкозернистой деструкции клеток.

Идентификация вируса проводится в РН, т. е. в культуры тканей вносят вирус в смеси с поливалентной противополиомиелитной сывороткой типов 1, 2, 3, а затем для определения типа – с отдельными типовыми сыворотками. При идентичности типа вируса и данной сыворотки ЦПД не возникает.

Молекулярно-биологический – ПЦР.

Серологический диагноз используют для определения нарастания титра АТ в крови переболевших людей. С этой целью применяют РН в культуре ткани с парными сыворотками, полученными в острой стадии болезни и в период реконвалесценции. Ставят РСК, ИФА. При положительном результате выявляют 4-кратное нарастание титра АТ во 2 сыворотке по сравнению с 1.

Ретровирусы. Вирусы иммунодефицита человека (ВИЧ). ВИЧ-инфекция: патогенез, иммунитет, этиологическая диагностика, принципы терапии, профилактика. СПИД-ассоциированные заболевания. ВИЧ-инфекция в Беларуси.

Семейство: Retroviridae.

Роды:

· Alpharetrovirus (простые) – вирус лейкоза птиц, саркомы Рауса.

· Betaretrovirus (простые) – вирус рака молочных желез мышей, эндогенный ретровирус человека.

· Gammaretrovirus (простые) – вирус лейкоза мышей Молони, кошек.

· Deltaretrovirus (сложные) – вирус лейкоза крупного рогатого скота, вирус Т-клеточного лейкоза человека (HTLV-1 и 2).

· Epsilonretrovirus (простые) – вирус саркомы кожи.

· Lentivirus (сложные) – ВИЧ-1 и ВИЧ-2, вирус Мэди/Висна.

· Spumavirus (сложный) – пенящиеся вирусы человека.

История. Название семейства (предложил Parks) эти вирусы получили из-за наличия в их составе уникального фермента – обратной транскриптазы (ревертазы, РНК-зависимой ДНК-полимеразы), осуществляющего обратный поток генетической информации:

РНК – обратная транскрипция – ДНК – иРНК – белок. Вирус, вызывающий ВИЧ-инфекцию, относится к роду Lentivirus, т.е. возбудитель медленных инфекций. Медленными эти вирусы называют потому, что они обуславливают инфекции с продолжительным инкубационным периодом, длительным хроническим течением и летальным исходом.

В 1981году в Атланте, штат Джорджия, в центре контроля за болезнями зарегистрировали новое заболевание, при котором погибали молодые люди, преимущественно мужчины, от разных причин: от тяжелой пневмонии, вызванной Pneumocystis carynii; от саркомы Капоши.

Эпиданализ выявил 4 группы риска (4Г): гомосексуалисты; наркоманы-героинисты; больные гемофилией; лица, бывавшие на Гаити. Исследование иммунного статуса этих лиц показало наличие иммунодефицита (ИД), отсюда название болезни – СПИД (AIDS) – синдром приобретенного иммунодефицита. В 1983г. Люк Монтанье в Институте Пастера в Париже из л.у. больного с лимфаденопатией выделил вирус, назвав его LAV. В 1984 г. Роберт Галло в Национальном институте рака в США также выделил вирус от подобного больного, назвав его HTLV-3. При сравнении LAV и HTLV-3 оказалась, что они идентичны. 1986г. МКТВ назвал вирус HIV(ВИЧ). В настоящее время различают два ВИЧ: ВИЧ-1 и ВИЧ-2.

Морфология.

-Вирус сложный

-Размеры средние – 100-120 нм

-Геном: +РНК – 2 молекулы (диплоидный геном), ассоциированные с ферментом ОТ и белком р7, р9 кд

-Кубический тип симметрии капсида – белок р24, р25 кд

-Суперкапсид состоит из внутреннего матриксного белка р17-18 кд и билипидного слоя, в который входят рецепторы gp – гликопротеиды – gp41 кд и gp120 кд

n Диплоидный геном состоит из 9749 нуклеотидов, 3 структурных генов (gag – кодирует внутренние белки: р7, р9, р24, р17; pol – кодирует ОТ, протеазу, интегразу; env – кодирует белки внешней оболочки: gp41 и gp120), 6 регуляторных генов (tat – отвечает за репликацию вируса; rev – отвечает за синтез белков, регуляторных или структурных; vif – фактор инфекционности; nef – определяет состояние покоя; vpu и vpr – функция до конца не выяснена, vpx – у ВИЧ-2).

n Нет гена onc.

n Высокая изменчивость (в 100 раз больше вируса гриппа), главными причинами которой являются ошибки ОТ.

Антигены. Антигенными свойствами обладают поверхностные гликопротеины (gp160, gp120, gp41), внутренние белки (р24, р18 и др.) и нуклеопротеиды р7, р9.

В настоящее время выделяют две антигенные разновидности вируса: ВИЧ-1, ВИЧ-2. Вначале появляются АТ к gp120, gp41, затем к р24, которые длительно сохраняются в крови.

Репродукция ВИЧ

1. Адсорбция ВИЧ на клетке- мишени, имеющей CD4, т.к. комплементарен белку gp120 вируса:

· Т-лимфоцит-хелпер - основная клетка-мишень

· макрофаги и моноциты

· нервные клетки

· клетки слизистой прямой кишки

· Не поражаются лимфоциты с маркером CD8

2. Проникновение ВИЧ в клетку путем слияния суперкапсида с клеточной мембраной– адсорбция, которая происходит при связывании gр120 с СD4-АГ на поверхности Т-хелперов и макрофагов; для успешного проникновения вируса требуется дополнительное взаимодействие gp120 вируса с клеточным хемокиновым рецептором CCR5;

3. Депротеинизация

4. Обратная транскрипция – синтез ДНК-копии. ОТ обладает несколькими активностями: ДНК-полимеразная (катализирует синтез ДНК, комплементарной вирусной), рибонуклеазная (расщепляет вирионную РНК), интегразная (катализирует встраивание ДНК-копии в хромосомную ДНК клетки, образуя провирус). С образованием провируса инфекция становится долговременной, клетка будет нести инфекционное начало до конца своей жизни, передавая потомству.

5. Вторая часть жизненного цикла ВИЧ – производство новых вирионов, при активации гена tat идет синтез НК и белков вируса, сборка вирионов и выход вируса путем почкования.

Резистентность. ВИЧ малоустойчив в окружающей среде. При комнатной температуре сохраняется до 4 суток, после обработки спиртом, эфиром инактивируется через 5-10 минут, быстро гибнет при действии моющих средств. При кипячении быстро погибает. ВИЧ достаточно устойчив к высушиванию, малочувствителен к УФИ.

Патогенез ВИЧ-инфекции

Источник инфекции: больной СПИДом и носитель ВИЧ. Вирус в организме инфицированного человека содержится во всех биологических жидкостях: в крови, в сперме, в слюне, в моче, в материнском молоке, в поте и т.д. Пути передачи ВИЧ: половой контакт, парентеральный, вертикальный. Не доказана передача ВИЧ контакта и трансмиссивно. Патогенез имеет 2 стадии: поражение иммунной системы и развитие оппортунистических инфекций и злокачественных опухолей.

Основной мишенью для ВИЧ являются клетки, несущие СD4-рецепторы. В первую очередь это Т-хелперы и моноциты, а также астроциты, сперматозоиды и др. Репродукция вируса из провируса начинается при стимуляции Т-хелперов любыми АГ.

Разрушение Т-хелперов приводит к глубокому нарушению системы иммунитета. Соотношение Тх/Тс становится меньше 1,0 (норма 1,4-2,0). Снижается абсолютное число Тх (менее 400 клеток в 1 мл крови при норме 800-1000 клеток /мл). Ослабляются иммунные реакции, снижается продукция иммуноглобулинов В-лимфоцитами, ИФ, комплемента, ИЛ. В результате заражения макрофагов они активируются, выделяют ИЛ1 и aФНО, которые индуцируют воспаление. Эти цитокины, особенно aФНО, стимулируют транскрипцию вируса, интегрированного в геном клетки. Макрофаги становятся основным резервуаром вируса в организме. Они переносят вирус в разные органы (мозг, почки и др.), а также инфицируют Т-хелперы при контакте с ними в лимфоузлах.

Стадии ВИЧ-инфекции:

n Инкубационный период – от момента заражения до появления первых симптомов или АТ. Продолжительность от нескольких недель до нескольких месяцев (в среднем – 6 месяцев, иногда 2-4 и более лет).

n Острая ВИЧ-инфекция развивается в 50-90% случаев и характеризуется лихорадкой, гриппоподобным синдромом, лимфаденопатией и др. Длительность от нескольких дней до нескольких месяцев.

n Латентная (бессимптомная) – может длиться годами (в среднем 2 года)

n Персистирующая генерализованная лимфаденопатия – характеризуется системным увеличением лимфатических узлов всех групп, частыми ОРВИ, может развиваться туберкулез и др.

n СПИД-ассоциированный симптомокомплекс:

1. Пре-СПИД – немотивированная лимфаденопатия, потеря массы тела, лихорадка, диарея, хроническая усталость, ночные поты.

2. СПИД

3. Оппортунистические инфекции и опухоли при СПИДе - СПИД-индикаторные болезни По ВОЗ: кандидоз, пневмоцистная пневмония, токсоплазмоз головного мозга, герпетическая инфекция (более 1 месяца), злокачественные опухоли: саркома Капоши и лимфома мозга.

Особенности ВИЧ-инфекции у детей

• Задержка темпов физического развития: отсутствие прибавки массы тела (дефицит составляет 10-20% и более от должной)

• Задержка нервно-психического развития

• Увеличение лимфатических узлов

• Длительная лихорадка

• Часто повторяющиеся бактериальные и вирусные инфекции

• Увеличение печени и селезенки

• Длительная диарея

• Редкие случаи саркомы Капоши

• Быстро прогрессирующее течение

Подходы к лечению ВИЧ-инфекции: Этиотропная терапия противовирусными препаратами (азидотимидин и др.) – ингибиторы ОТ; ингибиторы протеазы ВИЧ (инвираза). Иммуномодулирующая и иммунозаместительная терапия. Лечение вторичных инфекций.

Диагностика ВИЧ-инфекции

n Определение наличия вируса, его АГ или копий РНК в материалах от больного или ВИЧ-инфицированного.

n Серологическая диагностика, основанная на выявлении специфических АТ к поверхностным (gp120 и gp41) и внутренним (p18 и p24) белкам ВИЧ. У 90% больных антитела появляются в течение первых 3 месяцев после заражения, у 5-9% – через 6 месяцев, а у 1% – позже. Это исследование проводят в 2 этапа: на первом из них определяют АТ к вирусным белкам при помощи иммуноферментного анализа (ИФА). На втором этапе положительные сыворотки исследуют методом иммуноблотинга, в котором выявляют антитела против индивидуальных антигенов вируса. При выявлении антител не менее чем к трем антигенам (gp120, gp41, р24) человека считают ВИЧ-инфицированным.

n Выявление специфических для ВИЧ-инфекции изменений в иммунной системе.

n Лабораторная диагностика оппортунистических инфекций (СПИД-ассоциированных заболеваний).

Профилактика ВИЧ-инфекции

Специфическая профилактика ВИЧ-инфекции не разработана. Продолжаются интенсивные исследования по созданию вакцины. Неспецифическая очень активная.

ДНК-вирусы: классификация. Натуральная оспа: специфическая профилактика, эрадикация. Аденовирусы: классификация, характеристика. Аденовирусные инфекции: патогенез, иммунитет, этиологическая диагностика.

ДНК-геномные вирусы. Эти вирусы менее изменчивы, более консервативны, чем РНК-геномные; большинство из них реплицируются в ядрах клеток.

Семейства:

Adenoviridae – линейная, 2-нитчатая, нет суперкапсида.

Herpesviridae – линейная, 2-нитчатая, суперкапсид, простой гепатит, цитомегалия, ветряная оспа, инфекционный мононуклеоз.

Hepadnaviridae – кольцевая с 1-нитчатым участком, 2-нитчатая, суперкапсид, гепатит В.

Papovaviridae – кольцевая, 2-нитчатая, суперкапсида нет, папиллома, полиома.

Poxviridae – замкнутая, 2-нитчатая, суперкапсид, осповакцина, натуральная оспа.

Parvoviridae – линейная, 1-нитчатая, суперкапсида нет, аденоассоциированный вирус.

Семейство adenoviridae