АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология
|
Приложение № 5
Микробиологическая индикация ботулизма у больных и пищевых объектах:
В материалах:
- от больного (кровь, рвотные массы, кал. промывные воды желудка),
- из органов труппа (печень, желудок и кишечник с содержимым),
- в пищевых продуктах.
Цели лабораторной диагностики, обнаружение:
- ботулинического токсина и определение его типа;
-возбудителя ботулизма.
Методы исследования:
1. Микроскопический, ориентировочный (окраска по Граму, Ожешко).
2. Бактериологический, основной (в классическом и ускоренном вариантах) с учетом анаэробности.
3.Серологический, серо-биологический, косвенные.
Бактериологический метод исследования:
Правила отбора материала. Необходимо брать:
- Кровь - до введения антитоксической сыворотки. Из вены 6-8 мл в стерильную пробирку, выдержать 20 мин при +37оС. Сгусток отделить от стенок пробирки. Исследовать сыворотку (можно брать кровь в пробирку с 4% раствором лимоннокислого натрия в соотношении 3:1).
- Промывные воды желудка - 50-100 мл.
- Кал-50-60 мл.
- Из трупов (стерильно!). Поверхность органа прижечь раскаленным шпателем, стерильными ножницами вырезать ткань из глубины органа: кусочки печени - 50-60, отрезки тонкого кишечника (с содержимым), кусочки легочной ткани (50-60), кровь-10 мл.
- Продукты (не менее 100 мл): сырье для консервирования,
готовая продукция (рыбные, овощные, мясные консервы), остатки пищепродуктов, послуживших причиной отравления.
Примечание:
Каждый материала брать в отдельные, стерильные банки. Последние тщательно закрывать стерильными пробками, крышками.
Материал тщательно закрывать стерильными пробками и до исследования хранить на холоде, т.к. ботулинический токсин разрушается при комнатной температуре.
Этапы бактериологического исследования:
1. Обнаружение и идентификация ботулинических токсинов:
- цитратную кровь, сыворотку без обработки используют для постановки реакции нейтрализации;
- кал (20-25) растереть в ступке с 50 мл физиологического раствора; выдержать при комнатной температуре 1-1,5 часа (для экстрагирования токсина эмульсию профильтровать через ватно-марлевый фильтр и использовать фильтрат в реакции нейтрализации;
- пищевые продукты растереть, экстрагировать в физиологическом растворе 1 час., фильтровать через ватно-марлевый фильтр (или центрифугировать при 3000 об/мин. 15-20 мин.).
- органы трупа - экстракты из тканей готовят аналогично (§ 1-3) и используют в реакции нейтрализации.
Реакция нейтрализации.
Для выполнения реакции необходимы:
- 4 мыши (вес 16-18 г),
- смесь противоботулиновых сывороток (типы А, В, С /С1, С2/, Е, Д. J. g, в основном А, В, Е).
Опыт Контроль
0,5-0,8 мл фильтрата 0,5-0,8 мл фильтрата + 0,2 мл
(или центрифугата) смеси сывороток (по 0,01 мл
в/брюшинно каждого типа, содержащих от 50
до 400 ME антитоксических антител).
Примечание: перед введением смесь испытуемого материала и антисывороток выдерживают при +18°С 30 минут.
Наблюдение - 4 дня. При наличии токсина дыхание учащенное, мышцы расслабленные, причем, брюшная стенка «западает», перед гибелью у мышей появляются судороги, развивается паралич.
В случае гибели всех 4 мышей повторить реакцию нейтрализации с разведенным (в 5, 10, 20, 100 раз) экстрактом (или центрифугатом). После гибели животных повторяют
реакцию нейтрализации с моновалентными сыворотками.
Для определения типа токсина берут 6 рядов пробирок.
| Ингредиенты
|
|
| Проб
| и р к и
|
|
|
|
|
|
|
|
|
| 1.Фильтрат
2.Антитоксическая сы-
| 2,4
| 2,4
| 2,4
| 2,4
| 2,4
| 2,4
| ' воротка типа А
| 0,6
| -
| -
| -
| -
| -
| - ”- типа В
| -
| 0,6
| -
| -
| -
| -
| - ” - типа С
| -
| -
| 0,6
| -
| -
| -
| - ” - типа Е
| -
| -
| -
| 0,6
| -
| -
| - ” - типа F
| -
| -
| -
| -
| 0,6
| -
| 3.Физиологический раствор
|
|
|
|
|
| 0,6
| Выдержать 30 мин. при +18оС, ввести в/б 2 мышам по 1 из на каждой пробирки (для каждой сыворотки - отдельный шприц). Учет реакции через 4,6 часов, 24 и 96 часов.
При наличии токсина выживут мыши, получившие смесь токсина и гомологичной сыворотки. Например, если погибнут все мыши, кроме тех, которым введен экстракт с сывороткой типа А, то в материале содержится токсин типа А.
Для определения токсинемии
Ингредиенты
| Пробирки
|
|
|
|
| 1. Сыворотка больного
| 1,8
| 1,8
| 1,8
| 2. Антитоксическая сы
|
|
|
| воротка типа А
|
|
|
| 3. -”- типа Б
| 0,4
| -
| -
| 4. - ” - типа Е
|
| 0,4
| -
|
| -
| -
| 0,4
| |
30 минут при комнатной температуре, содержимое пробирок - по 1.0 мл ввести двум мышам в/б.
Учет по вышеописанным правилам.
Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 599 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 |
|