АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Постановка и учет реакций розеткообразования

Реакцию розеткообразования проводят в пробирках Флоринско-го, смешивая равные объемы, по 0,2-0,25 мл приготовленных суспен­зий лимфоцитов крови исследуемых животных с рабочими взвесями соответствующих для каждой реакции эритроцитарных маркеров. При этом в смеси должно содержаться 0,5-0,75 тыс. лимфоцитов, со­отношение которых с эритроцитарными маркерами должно быть в пределах 1:40-1:50. Создают условия для их взаимодействия, после которого клетки и образовавшиеся между ними комплексы фиксиру­ют и используют для изготовления постоянных препаратов, необхо­димых для учета результатов реакций.

Спонтанное розеткообразование.

0,25 мл лимфоцитов + 0,25 мл 0,8%-ной взвеси эритроцитов барана.

Центрифугируют 3 минуты при 180 g, инкубируют 30 минут при 30°С, инкубация 18 часов при 4-10°С.

В дальнейшем их фиксируют 0,5%-ным раствором глутарового альдегида 0,5 мл 20 минут при комнатной температуре. Прекращают фиксацию 4-5-кратными объемами дистиллированной воды.

Центрифугируют 10 минут при 180 g.

Реакции комплементарного, непрямого глобулинового и туберку­линового розеткообразования.

0,25 мл лимфоцитов + 0,25 мл 1%-ной взвеси эритроцитов быка.

Центрифугируют 3 минуты при 180 g, инкубируют 10 минут при 10°С.

После вышеприведенной фиксации выдерживают в течение 18-20 часов фиксированные лимфоциты глутаровым альдегидом клетки или центрифугируют 10 минут при 180 g.

Надосадок убирают, оставляя 0,2 мл, тщательно ресуспендируют, делают мазок типа «высушенной капли», высушивают, фиксируют в этиловом спирте 20 минут, окрашивают по Романовскому.

Подсчет ведут на 200 лимфоцитов, просматривая препараты под водной иммерсией с помощью светового микроскопа. Результат дает­ся а процентах. За розетку принимается лимфоцит, присоединивший не менее 3 эритроцитов. После соотнесения полученных данных с ре­зультатами гематологических исследований высчитывают содержа­ние розеткообразующих клеток в крови исследуемых животных в аб­солютных значениях.

Абсолютную численность клеток популяций розеткообразующих лимфоцитов крови исследуемых животных вычисляют по формуле

Ч = А ВС- 10"4,

где Ч - абсолютная численность клеток популяций розеткообразую­щих лимфоцитов в 1 мкл крови исследуемых животных; А - абсолютная численность лейкоцитов в 1 мкл крови; В - относительное количество лимфоцитов крови; С - относительное количество клеток популяций розеткообразующих лимфоцитов крови.

Дата добавления: 2014-12-12 | Просмотры: 1013 | Нарушение авторских прав