АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология
|
Выделение лимфоцитов на градиенте плотности
Для выделения лимфоцитов из крови крупного рогатого скота используется ряд методов, позволяющих получить относительно чистую суспензию лимфоцитов. Наибольшее количество этих клеток выделяется при центрифугировании в градиенте плотности урографина или смеси фиколл-урографина плотностью 1,077 г/см3.
Из 76%- или 60%-ного урографина с помощью дистиллированной воды получают 17%-ный раствор, доводя плотность до 1,092 г/см3. В теплой дистиллированной воде готовят 9%-ный раствор фиколла-400 и 34%-ный раствор урографина. Затем смешивают их в соотношении 12:5 соответственно и доводят плотность до 1,077 г/см3.
В пробирки Флоринского с помощью шприца с длинной иглой вносят по 2 мл 17%-ного раствора урографина или смесь фиколлурографина, на который наслаивают по 4 мл смеси равных объемов крови и раствора Версена, а затем центрифугируют по 20-30 минут при 420 g, если кровь от взрослых животных, или при 600 g, если кровь от молодых животных. После центрифугирования лимфоциты концентрируются в виде матового диска на границе двух жидкостей, а гранулоциты и эритроциты оседают на дно пробирки. Образовавшийся слой лимфоцитов извлекают шприцем с длинной иглой и отмывают от примесей центрифугированием в пробирках Флоринского по 5 минут при 210 g, используя дважды по 3 мл раствора Версейа, а затем такое же количество раствора Хенкса, в 1 мл которого готовят взвеси выделенных клеток с концентрацией 2-3 тыс./мкл лимфоцитов для последующих постановок реакций розеткообразования. Для подсчета разведения лимфоцитов в 0,38 мл 3%-ной уксусной кислоты вносится 0,02 мл взвеси лимфоцитов. Подсчитывают в камере Горяева в 5 больших квадратах, разделенных на 4, по диагонали. Полученную сумму делим на 8. Результат равен количеству мл раствора Хенкса, необходимого для разведения осадка лимфоцитов, чтобы получить концентрацию 2-3 тыс/мкл. Данный коэффициент выведен из расчета, что при концентрации 2-3 тыс/мкл в среднем должно содержаться 8 клеток в одном большом квадрате.
Дата добавления: 2014-12-12 | Просмотры: 1609 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 |
|