АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

АНТИТЕЛ НА ПРЕПАРАТАХ ЛИМФОЦИТОВ ТИПА

Прочитайте:
  1. D. клетки, регулирующие активность B-лимфоцитов
  2. Der p 1 способен «удалять» CD23 с поверхности В-лимфоцитов
  3. А. Появление антител к обкладочным клеткам
  4. Активация Т-лимфоцитов (2-х сигнальная модель)
  5. Антигены лимфоцитов
  6. Антитела
  7. АНТИТЕЛА
  8. АНТИТЕЛА ( ИММУНОГЛОБУЛИНЫ)
  9. АНТИТЕЛА (ИММУНОГЛОБУЛИНДЕР)

"ВЫСУШЕННОЙ КАПЛИ"

1) В градиенте фиколл-верографин выделить 0,5 млн. лейкоцитов нанести каплю (20 мкл.) на предметное стекло, осторожно поместить его на 20 мин. в бытовой холодильник при +4°С.

ВНИМАНИЕ: Стекло должно быть идеально чистым, обезжиренным и сухим. На жирных стеклах капля растекается.

2) По завершении 20 мин. остатки жидкости испарить под вентилятором при комнатной температуре, поместить на гистоло­гический планшет, закрыть и хранить до 3-х дней при +4°С, дольше - при минус 20°С, или сразу же проводить иммуно-гистохимическую реакцию. Если стекла хранились в холо­дильнике, их следует довести до комнатной температуры 20 - 30 мин.

3) Зафиксировать каплю в течение 10 мин. в парах 10%-го нейтрального формалина.

4) Промыть каплю 5раз по 100мкл. аптечного физиологического раствора, стряхнуть, «отсосать»капельки фильтровальной полоской. Следить за клетками,их можно нечаянно «отсосать».

5) Нанести 20 мклхорошо перемешанного раствора моноклонального антитела, инкубировать 1 часпри комнатной температуре под чашкойПетри, на влажной бумаге или салфетке.

6) Промыть по п. 4.

7) Нанести 20 мл. хорошо перемешанного пероксидазного конъюгата. Инкубировать по п. 5.

8) Минут за 10 до окончания инкубации (п. 7) начать готовить раствор хромогена. Ампулу с навеской (5 мг) DAB прилить 1 мл, трисбуфера (рН=7,2 – 7,4) перемешать хромогендо полногорастворения и перелить в стеклянный флакон с 4-мя мг трисбуфера, очень хорошо перемешать, добавить 50 мкл. аптечной 3%-ой перекиси водорода. Если субстрат быстро чернеет проверьте исходную концентрацию аптечной перекиси: она может быть выше, чем 3%!

9) Промыть по п.4.

10) Нанести 50 мкл. раствора хромогена и инкубировать от 1 до 10 мин. под визуальным контролем до появления окрашивания.

11) Отмыть по п. 5, слегка докрасить ядра метиловые зеленым, если необходимо. Отсосать жидкость, внести 20 мкл. 50% глицерина и учитывать реакцию (считать число желтовато-бурых клеток в попе зрения), опустив объектив микроскопа Х 90 в глицерин. Очень осторожно, если нет покровного стекла.

 

Табл. 8. Основные маркеры клеток иммунной системы

 

Антиген Популяция % клеток
CD2   Т- и NK-клетки   80 ± 7  
CD3   Т-клетки   72 ± 7  
CD4   Т-хелперы   39 ± 5  
CD5   зрелые Т-клетки, В-ХЛЛ   69 ± 5  
CD7   Т- и NК-клетки   75 ± 7  
CD8   Т- киллеры / супрессоры   23 ± 4  
CD1O   пре-В-лифоциты    
CD11b   Т-супрессоры   21 ± 6  
CD14   моноциты   100% моноцитов  
CD16   NK- клетки   12 ± 6  
CD19   В-клетки   9 ± 6  
CD20   В-клетки   9 ± 6  
CD2J   В-клетки   9 ± 6  
CD22   В-клетки   9 ± 6  
CD23   акт. В-клетки   3 ± 3  
CD27   90% CD4+ и 77% CD8+ клеток   65 ± 10  
CD29   часть CD4+ и CD8+ клеток   54 ± 11  
CD38   В-клетки, акт. лимфоциты   23 ± 6  
CD45   все лейкоциты    
CD45RA   50% CD4+ клеток и 75% CD8+ клеток, NK- и В-клетки   64+10  
CD50   ICAM-3, все лейкоциты    
CD54   ICAM-1   22 ± 8  
CD58   все лейкоциты    
CD59   все лейкоциты    
CD71   акт. лимфоциты    
CD72   В-клетки   9 ± 6  
CD75   В-клетки   9 ± 6  
CD95   Активированные лимфоциты    
I CD98   Активированные лимфоциты    
HLA-DR   моноциты. В—клетки и активированные Т-клетки   14 ± 7  

 

Качественные и количественные методы определения иммуноглобулинов.

 

Методы исследования иммуноглобулинов включают в себя определение уровня иммуноглобулинов разных классов и подклассов и антител к определенным антигенам. При оценке результатов ис­следования необходимо учитывать, что уровень иммуноглобулинов зависит от возраста. Изменение уровня имму­ноглобулинов в сыворотке может быть следствием нарушения их синтеза, катаболизма или выведения.

 


Дата добавления: 2014-12-12 | Просмотры: 784 | Нарушение авторских прав



1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 |



При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.003 сек.)