 |
|
АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология |
АНТИТЕЛ НА ПРЕПАРАТАХ ЛИМФОЦИТОВ ТИПА
"ВЫСУШЕННОЙ КАПЛИ" 1) В градиенте фиколл-верографин выделить 0,5 млн. лейкоцитов нанести каплю (20 мкл.) на предметное стекло, осторожно поместить его на 20 мин. в бытовой холодильник при +4°С. ВНИМАНИЕ: Стекло должно быть идеально чистым, обезжиренным и сухим. На жирных стеклах капля растекается. 2) По завершении 20 мин. остатки жидкости испарить под вентилятором при комнатной температуре, поместить на гистологический планшет, закрыть и хранить до 3-х дней при +4°С, дольше - при минус 20°С, или сразу же проводить иммуно-гистохимическую реакцию. Если стекла хранились в холодильнике, их следует довести до комнатной температуры 20 - 30 мин. 3) Зафиксировать каплю в течение 10 мин. в парах 10%-го нейтрального формалина. 4) Промыть каплю 5раз по 100мкл. аптечного физиологического раствора, стряхнуть, «отсосать»капельки фильтровальной полоской. Следить за клетками,их можно нечаянно «отсосать». 5) Нанести 20 мклхорошо перемешанного раствора моноклонального антитела, инкубировать 1 часпри комнатной температуре под чашкойПетри, на влажной бумаге или салфетке. 6) Промыть по п. 4. 7) Нанести 20 мл. хорошо перемешанного пероксидазного конъюгата. Инкубировать по п. 5. 8) Минут за 10 до окончания инкубации (п. 7) начать готовить раствор хромогена. Ампулу с навеской (5 мг) DAB прилить 1 мл, трисбуфера (рН=7,2 – 7,4) перемешать хромогендо полногорастворения и перелить в стеклянный флакон с 4-мя мг трисбуфера, очень хорошо перемешать, добавить 50 мкл. аптечной 3%-ой перекиси водорода. Если субстрат быстро чернеет проверьте исходную концентрацию аптечной перекиси: она может быть выше, чем 3%! 9) Промыть по п.4. 10) Нанести 50 мкл. раствора хромогена и инкубировать от 1 до 10 мин. под визуальным контролем до появления окрашивания. 11) Отмыть по п. 5, слегка докрасить ядра метиловые зеленым, если необходимо. Отсосать жидкость, внести 20 мкл. 50% глицерина и учитывать реакцию (считать число желтовато-бурых клеток в попе зрения), опустив объектив микроскопа Х 90 в глицерин. Очень осторожно, если нет покровного стекла.
Табл. 8. Основные маркеры клеток иммунной системы
Качественные и количественные методы определения иммуноглобулинов.
Методы исследования иммуноглобулинов включают в себя определение уровня иммуноглобулинов разных классов и подклассов и антител к определенным антигенам. При оценке результатов исследования необходимо учитывать, что уровень иммуноглобулинов зависит от возраста. Изменение уровня иммуноглобулинов в сыворотке может быть следствием нарушения их синтеза, катаболизма или выведения.
Дата добавления: 2014-12-12 | Просмотры: 788 | Нарушение авторских прав |