АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

ЛИМФОЦИТОВ

Прочитайте:
  1. D. клетки, регулирующие активность B-лимфоцитов
  2. Der p 1 способен «удалять» CD23 с поверхности В-лимфоцитов
  3. Активация Т-лимфоцитов (2-х сигнальная модель)
  4. Антигены лимфоцитов
  5. АНТИТЕЛ НА ПРЕПАРАТАХ ЛИМФОЦИТОВ ТИПА
  6. В – лимфоциты, связывающие CD 40 с CD 40L Т – лимфоцитов вызывая переключение на Т зависимые АГ.
  7. В-ЛИМФОЦИТОВ
  8. В-лимфоциты: развитие, маркёры, антигенспецифический В-клеточный рецептор. Методы определения количества и функциональной активности В-лимфоцитов.
  9. В. Исследование функций NK-лимфоцитов
  10. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ T– И B–ЛИМФОЦИТОВ

Пролиферативную активность Т-лимфоцитов оценивают по интенсивности синтеза ДНК в ответ на стимуляцию митогеном (поликлональная стимуляция) или антигеном (моно- и олигоклональная стимуляция). В последнем слу­чае применяются распространенные антигены или аллоантигены. Митогены стимулируют пролиферацию значительной части Т-лим­фоцитов, поэтому результат оценивают обычно через 3 суток. Антиген стимулирует пролиферацию только тех Т-лимфоцитов, которые несут рецептор к нему, поэтому индуцированную антигеном пролиферацию оценивают через 5—7 суток. Для оценки пролиферативной активности Т-лимфоцитов при­меняют набор широко распространенных антигенов.

В асептических условиях из вены берется 5 – 10 мл крови в пробирку, содержащую 100 – 200 ЕД гепарина. Содержимое пробирки осторожно перемешивают и оставляют на 60 мин. в термостате при t 37°С для осаждения эритроцитов, которое м.б. ускорено добавлением декстрана, желатина и др. После инкубации в термостате надосадочный слой плазмы, обогащен­ный лейкоцитами, отсасывают в отдельную стерильную про­бирку. Определяют число лейкоцитов в 1 мл. Затем взвесь лейкоцитов разводят питательной средой 199 (содержащей 200 ЕД пенициллина и 100 ЕД стрептомицина в 1 мл) таким образом, чтобы в 1 mi содержалось 1 000000 - 2 000000 лейкоцитов, 20% аутологичной плазмы и 80% культуральной среды.

Приготовленную лейкоцитарную взвесь разливают в стериль­ные флаконы по 1 мл, добавляют 0,1 мл предварительно оттитрованного антигена и пропускают газовую смесь, содержащую 5% углекислого газа. Флаконы закрывают пробками и помещают в термостат при t 37°С на 5 – 7 дней. За это время культура лейкоцитов периферической крови освобож­дается от сегментоядерных лейкоцитов, исключая эозинофилы, и содержит преимущественно одноядерные клетки, которые идентифицируются как малые, средние и большие лимфоциты, бласты, ретикулярные клетки и макрофаги.

Интенсивность РБТЛ оценивается различными методами.

Морфологический метод заключается в подсчете в окрашен­ном мазке активированных кпеток-бластов на 1000 клеток и определении их процентного содержания. Реакция расценивается как положительная, если число активированных клеток составляет не менее 4% от общего числа культивируемых клеток; максимальное число активированных клеток при действии специфического антигена может достигать 35%.

Изотопный метод позволяет определить общую активность культур лимфоцитов путем подсчета включенного в клетки, синтезирующие ДНК, меченного 3Н -тимидина, добавляемого в культуральную среду. Результаты обычно вы­ражают в импульсах в минуту (имп/мин) и в виде индекса стимуляции — отношение радиоактивности стимулиро­ванных и нестимулированных лимфоцитов.

Достоверность РБТЛ проверяется контрольными исследова­ниями с культурой исследуемых лимфоцитов без добавления антигена (для выявления спонтанной бласттрансформации) и с культурой лимфоцитов здоровых доноров, инкубируемой с соответствующим антигеном.

 


Дата добавления: 2014-12-12 | Просмотры: 706 | Нарушение авторских прав



1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 |



При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.002 сек.)