АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Тесты in vitro для диагностики lgЕ-опосредованных заболеваний

Прочитайте:
  1. I. Роль центров санитарно-эпидемиологического надзора в профилактике инфекционных заболеваний.
  2. II. Гиперкапния на почве хронических бронхолегочных заболеваний.
  3. II. Инструментальные методы диагностики
  4. II. Общие принципы иммунодиагностики инфекционных заболеваний
  5. II. Функциональные тесты.
  6. IV. Контрольные тесты c рисунками для проведения первого этапа экзамена
  7. IV. Контрольные тесты для проведения первого этапа экзамена
  8. IV. Права помощника врача-эпидемиолога (паразитолога) отделения природно-очаговых, особо опасных и паразитарных заболеваний
  9. LgE-опосредованные заболевания. Принципы диагностики заболеваний. Особенности сбора анамнеза. Наследственные аспекты аллергический заболеваний
  10. V 14: Семиотиканаследственных болезней и принципы их диагностики.

ЛАБОРАТОРНЫЕ ТЕСТЫ

ПРИСТ - прямой радиоиммуносорбентный тест

Тест для определения общего IgE в сыворотке крови. Используют технику, при которой нерастворимые иммуносорбенты с "пришитыми" антиIgЕ-антителами в течение 16 часов инкубируют либо со стандартом, либо с исследуемой сывороткой. Затем несвязанные IgE-антитела сыворотки удаляют отмыванием, после чего в течение 2-4 часов инкубируют с меченными 125J aнтиIgE-антителами. Несвязанные 125J антиIgЕ антитела снова удаляют отмыванием. По связанной радиоактивности определяют количество общего Ig E.
Радиоактивное мечение изотопом 131J, а в последнее время все чаще 125J - это многократно проверенный и надежный метод. Однако из-за того, что необходимые в этом случае реагенты опасны для здоровья и нестабильны в результате радиоактивного распада, были предложены и другие типы меток.
Успешно применяют ферменты, в частности пероксидазу и фосфотазу, которые при добавлении к реагирующим компонентам соответствующего бесцветного субстрата, называемого хромогеном, воздействуют на последний с образованием окрашенных продуктов реакции. На использовании ферментов основан, в частности, метод определения антител, а иногда и антигенов, называемый ELISA (от англ. enzyme linked immunosorbent assay) - твердофазный иммуноферментный анализ - ИФА.
Прямой метод выявления специфических Ig Е-антител:
Радиоаллергосорбентный тест (PACT)
Используют для количественной оценки антигенспецифических Ig Е-антител.
Принцип метода: содержание специфических Ig Е антител в сыворотке можно установить, используя их способность связываться с антигеном (аллергеном), находящимся на нерастворимом сорбенте-носителе. Если в используемой сыворотке содержатся соответствующие антитела, то после инкубации они взаимодействуют с аллергенами.
Несвязанные антитела сыворотки удаляют путем отмывания и оставшийся комплекс инкубируют с Ig Е-антителами, меченными 125J.
В том случае, если ранее (на 1 этапе реакции) произошло связывание реагинов с аллергенами, то молекулы 125J aнтиIgE взаимодействуют с этими реагинами. Несвязанные 125J aнтиIg E удаляют отмыванием.
Количество антигенспецифических антител определяют по связанной радиоактивности, используя соответствующие стандарты.
Преимущества PACT по сравнению с кожными пробами:
больной тратит меньше времени на исследование; на результаты не влияют принимаемые лекарственные препараты; выполнение теста не связано с риском развития у больного анафилаксии; есть возможность количественной оценки.
Недостатки PACT: не выявляет иных антител-реагинов, кроме IgE.
Примечание:
PACT хорошо коррелирует с другими пробами, особенно провокационными. По сравнению с внутрикожными пробами PACT является менее чувствительным, но более специфичным, то есть практически не дает ложноположительных результатов PACT предпочтителен у детей до 5 лет, у которых кожные пробы непрактичны, у больных экземой, которым они противопоказаны и при патологическом дермографизме, когда результаты проб ложноположительные.
Иммуноферментный анализ (ИФА)
ИФА может быть использован для количественной оценки общего Ig E в сыворотке крови. Метод основан на принципе "сандвича". К сорбированным на твердой фазе антиIgE-антителам добавляют испытуемую пробу сыворотки, инкубируют, отмывают. Затем сюда же вносят конъюгат антиIgЕ-антител с ферментом в расчете на то, что этот конъюгат может связаться со вторым свободным активным центром IgE-антител, находящихся в составе иммунных комплексов на твердой фазе. Затем стадии инкубации и отмывки, после чего вносят субстрат (хромоген), соответствующий использованному ферменту. О превращении субстрата свидетельствует изменение цвета в лунке или в пробирке с твердой фазой, причем окрашивание происходит только при наличии в составе сендвич-комплексов на твердой фазе, а соответственно и в исследуемой сыворотке крови иммуноглобулина E. Интенсивность цветной реакции оценивают спектрофотометрически относительно положительной и отрицательной контрольных проб.

Вопрос


Дата добавления: 2014-12-12 | Просмотры: 1268 | Нарушение авторских прав



1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 |



При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.027 сек.)