Иммуноферментный анализ принципы. Особенности «сендвич» твердофазного метода ИФА. Применение
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ, ИФА (Enzyme immunoassay) — метод выявления антигенов и антител, основанный на определении комплекса антиген-антитело за счет введения в один из компонентов реакции ферментативной метки с последующей ее детекцией с помощью соответствующего субстрата, изменяющего свою окраску.
Для определения антигенов и антител применяются твердофазный (гетерогенный) вариант иммуноферментного анализа. Использование твердой фазы позволяет упростить процесс разделения компонентов реакции за счет иммобилизации одного из компонентов на твердой фазе и удаления субстанций, не участвующих в реакции.
ИФА применяют для диагностики:
· Вирусных
· Бактериальных
· Паразитарных болезней
· Инфекций, в частности для диагностики ВИЧ-инфекций, Гепатита В и др.
· Определение гормонов
· Ферментов
· Компонентов комплемента
· Цитотоксинов
· Лекарственных препаратов и других БАВ, содержащихся в исследуемом материале.
55.В чем состоит двухэтапный принцип оценки иммунного статуса. Перечислите тесты 1 и 2 уровня. Какие биологические материалы используются для оценки иммунного статуса. Двухэтапный принцип оценки иммунного статуса: на первом этапе выявляют более общие дефекты клеточного и гуморального звена адаптивного и врожденного иммунитета. Тесты 1-го уровня:используются для определения:- относительного и абсолютного числа лейкоцитов и лимфоцитов в периферической крови(общепринятый анализ крови), - относительного и абсолютного количества Т- и В- лимфоцитов, NK-клеток с использованием моноклональных антител, -субпопуляций Т лимфоцитов, -концентрации сывороточных иммуноглобулинов основных классов(M,G,A),-фагоцитарной активности лейкоцитов, -активности комплимента, -возможен анализ других показателей(например, цитокинов).
На втором этапе использование аналитических тестов позволяет выявить более тонкие и конкретные дефекты в иммунной системе. Комплекс тестов 2-го уровня может существенно варьировать в зависимости от поставленных врачом задач. Определяют: количество субпопуляций Т лимфоцитов, -фенотипические хар-ки кл. иммунной системы на разных этапах иммуногенеза и иммунопоэза, -экспрессию активных маркеров,-пролиферативный ответ Т и В лимфоцитов на митогены, антигены и аллогенные кл., -активность килерных лимфоцитов, -классы и подклассы иммуноглобулинов,- различные этапы фагоцитоза и рецепторного аппарата фагоцитов, содержание различных компонентов комлимента, и др.показатели.
Используют различные биологические материалы: цельную периферическую кровь, сыворотку крови, плазму крови, клеточные элементы крови, спинномозговую жидкость, выделения из носа, мочу, слезную жидкость, цитоплазматические и ядерные компоненты кл. и др.
56.Охарактеризуйте этапы аллергологического обследования.Тесты in vivo.Преимущества.Особенности проведения внутрикожных проб.Скарификационные пробы. Прик-тесты. Оценка кожных проб. Противопоказания.
1.
1.Этапы аллергологического обследования: Сбор аллергоанамнеза (анамнеза болезни и жизни пациента).
2. Объективное обследование больного.
3. Данные инструментальных методов обследования (рентген, спирометрия, эндоскопия и т. д.).
4. Данные аллергологического тестирования in vivo.
5. Данные лабораторных исследований.in vitro
6. Данные эффективности назначенной терапии.
К методам in vivo относятся :
1)различные виды кожных проб (прик-тесты, скарификационные, и внутрикожные пробы с разными (стандартными наборами аллергенов).
При проведении тестов на кожу наносятся или в/кожно вводятся аллергены. По реакции на них (покраснение, появление аллергической реакции в месте нанесения/введения аллергена) судят о наличии аллергии
n внутрикожные пробы - применяются для выявления сенсибилизации к аллергенам бактериального и грибкового происхождения; для определения степени чувствительности к аллергенам неинфекционной природы;
n прик-тест - применяют для диагостики реагинового типа аллергических реакций, например, пищевой, лекарственной, пыльцевой аллергии.
n Patch-тесты чаще всего используют для выявления сенсибилизации на косметические средства и металлы
n В России благодаря невысокой стоимости и доступности определения, до настоящего времени наиболее распространенным является скарификационный тест.
n Аппликационные пробы — растворы стандартизованных аллергенов наносят на специальный аппликатор (пластырь).
Тесты выполняют на коже спины, предплечья.
Результаты учитывают через 20–30 мин
Реакция оценивается следующим образом:
в виде эритемы и отека - +, в виде папул - ++, с наличием волдыря- +++
Положительный результат свидетельствует о наличии сенсибилизации организма к тому или иному аллергену. Степень выраженности реакций коррелирует с активностью патологического процесса и тяжестью течения заболевания.
Применяют для выявления аллергических реакций на пищевые, ингаляционные и др. аллергены, используются для диагностики контактной сенсибилизации на лекарственные препараты, химические аллергены, ионы металлов
Скарификационные пробы
— способ проведения кожных проб, при котором каплю испытуемого аллергена наносят на обработанную спиртом кожу внутренней стороны предплечья и повреждают эпидермис под каплей, путем нанесения двух насечек скарификатором (опыт).
Одновременно аналогичным образом проводят пробы с гистамином и физ. раствором
(соответственно (+) и (-) -контроли).
Результат учитывают через 20–30 мин.
Применяются для выявления сенсибилизации организма при ГНТ I типа. Характеризуются большей чувствительностью и, к сожалению, большей опасностью развития системных аллергических реакций.
| Прик-тесты — способ проведения внутрикожных проб для диагностики ГНТ.
Специальную металлическую или пластиковую иглу с ограничителем погружают в раствор аллергена и прокалывают кожу на глубину 1мм.
В качестве (+)- контроля используют 10% р-р гистамина, а (-)- растворитель.
Результат учитывают через 15–20 мин измеряя диаметр папулы в двух направлениях.
Дата добавления: 2015-01-12 | Просмотры: 1077 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 |
|