АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Непрямой метод. РИФН - реакция иммунофлюоресценции непрямая.

РИФН - реакция иммунофлюоресценции непрямая.

На обезжиренное предметное стекло наносят мазки из исследуемого материала или делают отпечатки из культур клеток или органов. Препарат подсушивают, фиксируют и наносят на мазок иммунную сыворотку, гомологичную по специфичности определяемому микробу. Препарат помещают во влажную камеру на 30 мин при 37^о С, затем хорошо промывают растворителем для удаления свободных компонентов сыворотки, ополаскивают в воде дистиллированной 10 мин, сушат при комнатной температуре и вносят меченую сыворотку против иммуноглобулинов иммунной сыворотки.

Эта видовая антисыворотка предварительно метится флюорохромом или используют коммерческую меченую антисыворотку.

Препарат помещают во влажную камеру на 30 мин при 37^о С, затем хорошо отмывают растворителем и прополаскивают дистиллированной водой, сушат и просматривают в люминисцентном микроскопе.

Если в исследуемом препарате содержится микроб, то с ним взаимодействуют антитела иммунной сыворотки и остаются фиксированными на мазке. Меченая антисыворотка будет взаимодействовать с Fc-фрагментами антител иммунной сыворотки и ее антитела также будут фиксированы на мазке. Это проявится специфическим свечением вокруг микробов. Если микробов нет, то антитела не фиксируются, характерного свечения не будет (результат отрицательный). При этом необходимы контроли: незараженный материал, гетерогенная культура, гомологичные микробы (положительный контроль). С помощью этого метода можно определять антитела в сыворотке при известном микробе в мазке.

Торможение метода.

РИФТ - реакция иммунофлюоресценции торможение.

На обезжиренное предметное стекло наносят два мазка-отпечатка или делают мазки из исследуемого материала. Их подсушивают, фиксируют и добавляют к опытному мазку одновременно иммунную сыворотку, специфичную к предполагаемому микробу, и вторую – эту же иммунную сыворотку, только меченую флюорохромом. В контрольный мазок вносят иммунную сыворотку, меченую флюорохромом. Препарат выдерживают 30 мин во влажной камере при 37^о С, отмывают и прополаскивают дистиллированной водой, просушивают и просматривают под люминисцентным микроскопом с иммерсионной системой.

Если в материале был микроб, то произойдет конкуренция меченых и немеченых антител за связывание с ним. Результатом их конкуренции будет снижение интенсивности специфического свечения в опытном мазке по сравнению с контролем, где одна меченая сыворотка. Если антигена нет, то свечение будет отсутствовать в обоих мазках.

Дата добавления: 2015-10-11 | Просмотры: 468 | Нарушение авторских прав