АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Непрямой метод.

Полистироловые планшеты, применяемые для ИФА, нагружают антигеном в рабочей дозе (предварительно выбирается доза, связывающая 50 % метки). Для этого, растворимый антиген (вируссодержащую жидкость) заливают в лунки микротитратора пипетками по 0,1 мл и оставляют на ночь при комнатной температуре. На другой день лунки с антигеном трижды отмывают растворителем для удаления свободного антигена.

В лунки с сорбированным антигеном вносят по 0,1 мл разведения испытуемой на антитела сыворотки. Разведения сыворотки предварительно готовят в пробирках и по 0,1 мл вносят в лунки планшета, начиная с последней пробирки (вносят в последнюю лунку) и т.д. Планшету оставляют на 40 мин при 37^о С, трижды отмывают растворителем для удаления свободных компонентов сыворотки.

Предварительно готовят конъюгат. Из антисыворотки кроличьей против сывороточных белков человека получают глобулин, путем высаливания 40 % сульфатом аммония. От соли глобулин очищают одним из методов, например, пропуская через сефадекс G50. Затем этот глобулин добавляют к смеси J ¹²⁵ и хлорамина Т в равных объемах, через 2 мин реакцию останавливают с помощью NaHSO₃ и проводят разделение меченого глобулина и свободных компонентов на сефадексе-G25. Меченый глобулин консервируют 0,2 % азида натрия.

Заранее приготовленный конъюгат вносят во все лунки планшет по 0,1 мл, выдерживают в течение 40 мин при 37^о С, а затем трижды отмывают лунки растворителем. Далее в лунках плпншет следует проводить определение доли связанного йода по сравнению с количеством его в конъюгате.

Дата добавления: 2015-10-11 | Просмотры: 418 | Нарушение авторских прав