Серологические исследования
Реакции иммунитета — это реакции между антигеном и антителом или между антигеном и сенсибилизированными лимфоцитами (повышенная чувствительность), которые происходят в живом организме и могут быть воспроизведены в лабораторных условиях. Реакции антигена с антителом называются серологическими, или гуморальными, потому что участвующие в них антитела (иммуноглобулины) всегда находятся в сыворотке крови.
Реакции антигена с сенсибилизированными лимфоцитами называются клеточными (серологические реакции).
Серологические реакции — реакции взаимодействия между антигеном и антителом — протекают в две фазы:
1-я специфическая (образование комплекса антигена и соответствующего ему антитела). Видимого изменения в этой фазе не происходит, но образовавшийся комплекс становится чувствительным к неспецифическим факторам, находящимся в среде (электролиты, комплемент, фагоцит);
2-я неспецифическая. В этой фазе специфический комплекс антитело—антиген взаимодействует с неспецифическими факторами среды, в которых происходит реакция.
Их взаимодействие — склеивание, растворение. Характер видимой фазы серологических реакций зависит от состояния антигена и условий среды, в которой происходит его взаимодействие с антителом. Различают реакции агглютинации, преципитации, иммунного лизиса, связывания комплемента.
Реакции, происходящие в присутствии антител
| Антигены, взаимодействующие с антителами
| Неспецифические
компоненты
реакции
| Агглютинация Г емагглютинация
| Бактерии
Эритроциты
| Электролиты
(изотонический
раствор)
| Преципитация
| Белки, экстракты органов и тканей; лизаты, гаптены
| То же
| Иммунный лизис: бактериолизис, гемолиз, цитолиз
| Бактерии Эритроциты Другие клетки
| Комплемент
| Реакция связывания комплемента
| Гаптены, экстракты, лизаты, полные антигены, клетки
|
| Нейтрализация
| Токсины, вирусы
| Электролиты
| Фагоцитоз
| Бактерии
| Фагоциты
|
Применение серологических реакций:
1) Серодиагностика — выявление антител в сыворотке больного.
2) Идентификация — определение вида или типа антигена, выделенного от больного микроорганизма.
Цель исследования
| Антиген
| Антитело
| Положительный результат реакции
| Определение антител (серодиагностика)
| Известный
(диагности-
кум)
| Сыворотка
больного
| В сыворотке больного есть антитела к известному антигену
| Определение антигена (идентификация)
| Неизвестный
| Иммунная (диагностическая сыворотка)
| Изучаемый антиген идентичен тому, которым иммунизировали животное
|
Серологические реакции применяют также для определения активности (титра) сывороток и в научных исследованиях.
РА-реакция агглютинации — это склеивание и выпадение в осадок микробов или других клеток под действием антител в присутствии электролита (изотонического раствора натрия хлорида). Образовавшийся осадок называют агглютинатом.
РГА -реакция гемагглютинации
1РГА — относится к серологическим. В этой реакции эритроциты агглютинируются при взаимодействии с соответствующими антителами (гемагглютининами). Реакцию широко используют для определения группы крови.
2РГА — не является серологической. В ней склеивание эритроцитов вызывают не антитела, а особые вещества, образуемые вирусами. Например, вирус гриппа агглютинирует эритроциты кур и морских свинок, вирус полиомиелита — эритроциты барана. Эта реакция позволяет судить о наличии того или иного вируса в исследуемом материале.
Реакция торможения гемагглютинации. Это серологическая реакция, в которой специфические противовирусные антитела, взаимодействуя с вирусом (антигеном), нейтрализуют его и лишают способности агглютинировать эритроциты, т.е. тормозят реакцию гемагглютинации. Высокая специфичность реакции торможения гемагглютинации (РТГА) позволяет с ее помощью определить вид и даже тип вирусов, обнаруженных при постановке РГА.
Реакция непрямой гемагглютинации. Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА) основана на том, что эритроциты, если на их поверхности адсорбировать растворимый антиген, приобретают способность агглютинировать при взаимодействии с антителами к адсорбированному антигену.
При помощи РНГА можно определять неизвестный антиген, если на эритроциты адсорбировать заведомо известные антитела. Реакцию гемагглютинации можно ставить в объеме 0,025 мл (микрометод), пользуясь микротитратором Такачи.
Реакция преципитации. В реакции преципитации происходит выпадение в осадок специфического иммунного комплекса, состоящего из растворимого антигена (лизата, экстракта, гапте- на) и специфического антитела в присутствии электролитов. Образующееся в результате этой реакции мутное кольцо или осадок называют преципитатом. От реакции агглютинации эта реакция в основном отличается размером частиц антигена. Реакцию преципитации обычно применяют для определения антигена при диагностике ряда инфекций (сибирская язва, менингит); в судебной медицине — для определения видовой принадлежности крови, спермы; в санитарно-гигиенических исследованиях — при установлении фальсификации продуктов; с ее помощью определяют филогенетическое родство животных и растений. Для реакции необходимы:
1) антитела (преципитины) — иммунная сыворотка с высоким титром антител. Титр преципитирующей сыворотки устанавливают по наибольшему разведению антигена, с которым она дает реакцию. Сыворотку обычно применяют неразведенной или в разведении 1:5-1:10;
2) антиген — растворимые вещества белковой или липо- идно-полисахаридной природы (полные антигены и гаптены);
3) изотонический раствор. Основные методы проведения реакции преципитации: реакция кольцепреципитации и реакция преципитации в агаре (геле).
Реакция лизиса (иммунный цитолиз). Иммунный лизис — это растворение клеток под воздействием антител при обязательном участии комплемента. Для реакции необходимы:
антиген — микробы, эритроциты Или другие клетки;
антитело (лизин) — иммунная сыворотка, реже — сыворотка больного. Бактериолитическая сыворотка содержит антитела, участвующие в лизисе бактерий; гемолитическая — гемолизины, способствующие лизису эритроцитов; для лизиса спирохет нужны спирохетолизины, клетки цитолизина.
Комплемент — больше всего комплемента в сыворотке морских свинок. Эту сыворотку обычно используют в качестве комплемента. Свежий (нативный) комплемент нестоек и легко разрушается при нагревании, встряхивании, хранении, поэтому пользоваться им можно не дольше двух дней после получения. Для консервации комплемента к нему добавляют 2%-ную борную кислоту и 3%-ный сульфат натрия. Такой комплемент можно сохранять при 4 °С до двух недель. Чаще применяют сухой комплемент. Перед употреблением его растворяют в изотоническом растворе до первоначального объема.
Реакция связывания комплемента РСК — основана на том, что специфический комплекс антиген—антитело всегда адсорбирует на себе (связывает) комплемент. Эту реакцию широко применяют при идентификации антигенов и в серодиагностике инфекций, особенно заболеваний, вызванных спирохетами (реакция Вассермана), риккетсиями и вирусами. РСК — сложная серологическая реакция. В ней участвуют комплемент и две системы антиген—антитело.
Дата добавления: 2015-12-15 | Просмотры: 896 | Нарушение авторских прав
|