АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Краткие теоретические сведения. Куриные эмбрионы при заражении вируссодержащим мате­риалом не всегда погибают, поэтому их следует выдержать опре­деленное время в термостате или в

Куриные эмбрионы при заражении вируссодержащим мате­риалом не всегда погибают, поэтому их следует выдержать опре­деленное время в термостате или в лабораторном инкубаторе (обычно 5...10 суток, срок зависит от вида вируса). Перед вскры­тием их на 2...3 ч помещают в холодильник при 4...6 °С. При ох­лаждении кровеносные сосуды сокращаются, что предупреждает кровотечение и возможность адсорбции вирусов на эритроцитах в процессе вскрытия эмбриона и отбора вируссодержащего мате­риала. Затем скорлупу в месте воздушной камеры обрабатывают 70%-ным спиртом, обжигают на пламени, снова обрабатывают 0,5%-ной настойкой йода и опять обжигают.

Чтобы получить аллантоисную и амниотическую жидкости, скорлупу стерильными ножницами обрезают на 2...3 мм выше границы воздушной камеры. Яйцо слегка наклоняют, уда­ляют оставшуюся подскорлупную оболочку и через прокол в хорион-аллантоисной оболочке пас­теровской пипеткой, избегая повреждения сосудов, отса­сывают6...10 мл прозрачной аллантоисной жидкости. После этого пинце­том захватывают эмбрион, пастеровской пипеткой про­калывают амниотическую оболочку и отсасывают амниотическую жидкость (0,5...1,5 мл). Эмбрион при этом необхо­димо передвигать, чтобы не закупоривалась пипетка.

Далее ножницами по кругу (граница воздушной камеры) подрезают хорион-аллантоисную оболочку, удаляют этот ее уча­сток и все содержимое эмбриона извлекают в чашку Петри. Оставшуюся хорион-аллантоисную оболочку помешают в стерильную чашку Петри, тщательно расправляют и макроскопически исследуют на темном фоне. Для этого чашку Петри уста­навливают на черную бумагу. Затем отделяют эмбрион, разрезают оболочку желточного мешка, освобождают ее от желтка, промы­вают физиологическим раствором и также помещают в отдельную чашку Петри.

Материал, взятый из куриных эм­брионов, обязательно проверяют на присутствие бактерий путем высева на МПА, МПБ. Следует иметь в виду, что патологоанатомические изменения за­висят от вида вирусов и метода зара­жения РКЭ. Наиболее характерные изменения локализуются на хорион-аллантоисной оболочке: воспалитель­ные очаги — непрозрачные, бело-серого цвета, часто округлой формы; перламутровые бляшки с некротиче­ским центром; кровоизлияния.

На теле и голове зародыша, оболочке желточного мешка могут быть кровоизлияния, застойные явления в сосудах лапок и крыльев, в некоторых случаях — отставание в росте ("карликовость"), скручивание и отечность. Иногда отмечается увеличение печени кровоизлияния на ее поверхности. Для быстрого обнаружения гемагглютинирующего вируса в исследуемой эмбриональной жидкости (содержимое аллантоисной и амниотической полостей) ставят капельную реакцию гемагглютинации. Для необходимо иметь 5%-ную взвесь эритроцитов кур на физиологическом растворе, предметное или часовое стекло и пастеровские пипетки.

Техника постановки данной реакции сводится к следующему. На поверхность предметного стекла наносят каплю исследуемой жид­кости и каплю 5%-ной взвеси эритроцитов кур и перемешивают.

В положительном случае реакция наступает через 3...5 мин. Если в жидкости находится гемагглютинирующий вирус, то при взаимо­действии его с эритроцитами обра­зуется агглютинат (происходит агглютинация эритроцитов), а надосадочная жидкость становится прозрачной. Если вирус отсутствует или не обладает гемагглютинирующими свойствами, эритроциты остаются во взвешенном состоянии, жидкость остается мутной.

При выделении и культивировании вирусов на куриных эм­брионах, как правило, проводят несколько (не менее 3) быстро следующих один за другим пассажей. Это позволяет исключить токсичность исследуемого материала, способствует адаптации ви­руса, повышению его вирулентности и более интенсивному про­явлению патологоанатомических изменений в эмбрионах. Длякаждогопоследующего пассажа используют патологический ма­териал предшествующих, обязательно определяют титр (концен­трацию) вируса.

Дата добавления: 2015-12-16 | Просмотры: 373 | Нарушение авторских прав