АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

ЗАНЯТИЕ 1. Подготовка вируссодержащего материала для транспортировки и заражения лабораторных объектов

Цель занятия: ознакомиться с техникой взятия, упаковки и транспортировки, сохранения и подготовки вируссодержащего материала для заражения лабораторных животных, куриных эмбрионов и культуры клеток.

Оборудование и материалы: пенициллиновые флаконы с кусочками паренхиматозных органов, залитых раствором Хенкса и замороженных, стерильные фарфоровые ступки с пестиками, стерильный стеклянный песок, стерильные чашки Петри (по две на рабочее место), стерильные центрифужные пробирки (количество их должно соответствовать числу рабочих мест), раствор Хенкса, пенициллин и стрептомицин, МПА, МПБ в пробирках на каждое рабочее место, стерильные пенициллиновые флаконы, стерильные резиновые пробки №14 или 14,5, ножницы, пинцеты, спиртовки, центрифуга, бумажные фильтры, таблицы по теме.

Краткие теоретические сведения

Вирусологическое исследование сводится к выделению вируса из патматериала, его серологической идентификации и подробному изучению различных свойств (патогенность, антигенность, культивируемость в лабораторных условиях, морфологические признаки).

В каждом случае заболевания с подозрением на вирусную этиологию в первую очередь надо выделить возбудителя из патматериала. В этой связи правильный отбор, упаковка, транспортировка и обработка материала имеют очень большое значение для успешной постановки диагноза на вирусное заболевание.

Материал для исследования. От заболевших, павших или вынужденно убитых животных его отбирают как можно быстрее после появления четких признаков болезни или не позднее 2...3 ч после их клинической смерти или убоя. Это связано с тем, что сразу после заболевания или в первые 1-2 дня болезни значительно ослабевает барьерная роль кишечника, что наряду с повышенной проницаемостью кровеносных сосудов, способствует распространению кишечной микрофлоры

При взятии материала для выделения вируса следует исходить из патогенеза изучаемой инфекции (входные ворота, пути распространения в организме, места репродукции и пути выделения). Так, при респираторных инфекциях для выделения вирусов берут носоглоточные смывы, мазки из носовой полости и глотки, соскобы трахеи и кусочки легкого трупов; при энтеровирусных — кал; при нейротропных — кусочки головного или спинного мозга; при дерматропных инфекциях — свежие поражения кожи и т.п., т.е. отбирают тот материал, в котором предполагается наиболь­шая концентрация вируса. Материалом для выделения вируса могут служить различные экскреты и секреты, кусочки органов, кровь, лимфа и пр.

При вскрытии трупов животных материал отбирают при строгом соблюдении всех правил асептики и антисептики, чтобы не заразиться самому, не внести посторонних возбудителей в исследуемый материал и не допустить распространения инфекционного начала.

Кровь берут из яремной вены, кончика хвоста или уха, венозного сплетения глаз и т.д.

Для выделения вируса используют цельную дефибринированную, "лаковую" кровь (смесь крови с дистиллированной водой в отношении 1:1), либо отдельные элементы крови (эритроциты, лейкоциты, плазма, сыворотка).

Для обнаружения противовирусных антител кровь берут у одного и того же животного дважды с интервалом в 2...3 недели (для получения парных сывороток в объеме не менее 5,0 мл каждой).

Смывы со слизистой оболочки носовой полости, глаз, с задней стенки глотки, прямой кишки и клоаки у птиц берут стерильными ватными тампонами и погружают их в пенициллиновые флаконы или пробирки, содержащие 3-5 мл соответствующей жидкости. Наиболее часто для этого используют раствор Хенкса или среды для культур клеток (ГЛА, 199, Игла) с антибиотиками (пенициллин, стрептомицин по 500 ЕД и нистатин по 20 ЕД на 1 мл среды) с белковым стабилизатором, например, 0,5%-ным раствором желатина или 0,5...1%-ным раствором альбумина бычьей сыворотки. Присутствие стабилизаторов необходимо для предотвращения быстрой инактивации некоторых вирусов, например, вируса парагриппа.

При взятии материала из носоглотки можно использовать прибор, сконструированный Томасом и Стоком. Он состоит из трубки диаметром 9 мм и длиной 30 см, внутри которой помещается вторая тонкая трубка с нержавеющим стержнем, оканчивающимся нейлоновой щеткой. Прибор вводят глубоко в носовые ходы (хоаны) или в горло через носовой ход, выдвигая щеточку, а затем вновь задвигая ее в трубку перед тем, как вынуть прибор из органа. Щеточку тщательно отмывают от слизи и клеток в 2 мл жидкости (раствор Хенкса).

Слюну отбирают при наличии признаков поражения ротовой полости или слюнных желез. Вытекающую изо рта слюну можно собрать прямо в пробирку. Если ее выделяется мало или она не вытекает, необходимо пропитать слюной стерильный там­пон на палочке, а затем поместить в пробирку с небольшим количеством раствора Хенкса и закрыть резиновою пробкой. Для усиления слюноотделения животному можно ввести пилокарпин из расчета 0,02...0,05 г на 1 кг массы.

Мочу отбирают при помощи катетера в стерильную посуду.

Фекалии берут из прямой кишки при помощи шпателя или палочкой и помещают в стерильную пробирку или пенициллиновый флакон.

Везикулярную жидкость собирают шприцем или пастеровской пипеткой в стерильную пробирку.

Стенки афт, корочки с поверхности кожи снимают пинцетом.

Спинномозговую жидкость берут асептически путем обычной пункции.

В качестве патматериала используют кусочки органов объемом несколько см³ и массой 10-20 г, которые:

а) имеют видимые отклонения от нормы по форме, размеру, цвету, консистенции, наличию необычных образований;

б) могут быть поражены и содержать вирус;

в) наиболее часто содержат вирус — печень, селезенка, легкие, головной мозг, лимфатические узлы, почки.

Таблица 1.

Дата добавления: 2015-12-16 | Просмотры: 608 | Нарушение авторских прав