АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Дополнение 9.2. Сколь велика библиотека генома?

Число независимо клонируемых случайно выбранных фрагментов ДНК, необходимое для того, чтобы составить библиотеку генома (иногда говорят «банк генов»), зависит от размера генома организма и от величины клонируемых фрагментов ДНК. Пусть N— число независимых клонов, составляющих библиотеку; Ρ -вероятность того, что данная нуклеотидная последовательность представлена в библиотеке; L- средняя величина клонируемых фрагментов ДНК; Х- размер данной искомой нуклеотидной последовательности; M -размер генома.

Тогда Это выражение1 позволяет определить вероятность того, что в коллекции из N клонов представлен ген величины X. Обычно в качестве минимально приемлемого значения вероятности выбирается F = 0,99 и разрабатывается состав реакционной смеси, гарантирующей получение числа независимых рекомбинантных векторов, превышающих данное N. 1 Clarke L., Carbon J. (1976). Cell, 9, 91-99.

сомы дрозофилы, включает конец делеции , можно начать «прогулку по хромосоме».

Делая первый шаг по хромосоме, мы используем радиоактивно меченный рестрикционный фрагмент ДНК дрозофилы в λcDm 1 570 в качестве зонда, позволяющего отобрать в библиотеке генов дрозофилы другие фаги, гибридизирующие с ним. При этом оказывается, что существует общий участок у векторов λcDml570 и λcDm2001 (рис. 9.16). Следующий шаг состоит в том, чтобы используя в качестве зонда радиоактивно меченный фрагмент рестрикции вектора λcDm2001, расположенный праве.е участка, общего с вектором λcDml570, выбрать из библиотеки новые фаги, гибридизирующие с λcDm2001. Таким способом из библиотеки последовательностей отбирается набор фрагментов с общими участками; полученная таким образом коллекция рекомбинантных фагов дает расшифровку последовательности вправо от гена Sgs- 4(рис. 9.16). Из карт сайтов рестрикции отдельно взятых клонируемых сегментов можно собрать карту участка хромосомы в целом. Для того чтобы в процессе такой «прогулки по хромосоме» следить, в какой именно точке мы находимся, следует использовать клонируемые зонды для локализации на карте рестрикции концевых точек других хромосомных перестроек (рис. 9.18). В результате такой процесс прогулки по хромосоме может быть спроецирован на цитологическую карту, поскольку известны клоны, захватывающие концевые точки делеций

288 Организация и передача генетического материала

Дата добавления: 2015-12-16 | Просмотры: 422 | Нарушение авторских прав