 |
|
АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология |
Моноклональные АТ
В 1976 г. впервые применена соматическая гибридизация для слияния миеломных (опухолевых) и нормальных АТобразующих кл, что привело к созданию принципиально новой технологии гибридом. 1. Отбор миеломных кл по двум критериям: 1) Не способных секретировать Ig. 2) Устойчивых к 8-азагуанину или 6-тиогуанину (для селекции в последующем слившихся кл). 2. Слияние миеломных и АТпродуцирующих кл. Происходит под воздействием вируса Сендай или полиэтиленгликоля. 3. Отбор слившихся кл. При соблюдении всех технологий доля слившихся кл невелика, поэтому важен их тщательный отбор. Нормальные партнеры для слияния живут несколько дней и отмирают сами. Для подавления роста опухолевых партнеров используют НАТ-среды, содержащие гипоксантин, аминоптерин и тимидин. Аминоптерин – яд, отключающий основной путь биосинтеза нуклеотидов, гипоксантин и тимидин – субстраты для реализации запасных путей, заблокированных у миеломных кл, о чем свидетельствует их устойчивость к 8-азагуанину или 6-тиогуанину, но реализуемых у гибридных кл, которые наследуют соответствующий ген от нормального родителя. В результате на НАТ-среде выживают только гибридные кл. 4. Отбор кл-продуцентов нужных АТ. Для этого используют тестирование АТ к растворимым АГ в иммуноферментных тест-системах или АТ к мембранным АГ методом проточной цитометрии. При выявлении нужных кл их клонируют – выращивают в убывающих разведениях, при которых в одной лунке одна кл. Получив несколько клонов, поддерживают те из них, которые обладают преимуществами перед другими по тонкой специфичности, продуктивности, скорости роста, изотипу и т.д. 5. Отобранные и стабилизированные путем повторных клонирований гибридомы хранят в замороженном виде, а для наработки моноклональных АТ используют культивирование in vitro или in vivo – в брюшной полости сингенных мышей. В настоящее время разработана гумманизация мышиных АТ – создание «слитых» генетических комплексом, объединяющих V-ген мышиных моноклональных АТ и С-гены Ig человека желаемого генотипа. Дата добавления: 2015-01-12 | Просмотры: 719 | Нарушение авторских прав |