АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Сущность метода

Осахаривающая активность (ОСп) характеризует способность ферментов катализировать гидролиз крахмала до редуцирующих сахаров. В процессе этой реакции образуется целый комплекс редуцирующих сахаров, поэтому осахаривающую активность определяют в пересчете на тот сахар, который преобладает в гидролизате: на мальтозу при анализе солодов, на глюкозу при анализе препаратов, полученных с помощью большинства грибных продуцентов.

Определение осахаривающей активности с помощью поляриметра (Осп) основано на определении скорости ферментативной реакции гидролиза крахмала, которая устанавливается по уменьшению величины угла вращения плоскости поляризации. Это уменьшение происходит за счет образования низкомолекулярных углеводов под действием ферментов на крахмал.

За единицу активности принимают такое количество фермента, которое в строго определенных условиях гидролизует до низкомолекулярных углеводов 1 г крахмала, который составляет 10 % от введенного в реакцию.

– рН 4,8…4,9 для солода (применяется фосфатный буфер) или 4,7…4,8 для плесневых грибов (применяется ацетатный буфер);

– температура 50 ^оС;

– время действия фермента 30 минут;

– объем смеси 30 мл (20 мл субстрата и 10 мл рабочего раствора фермента.

Поляриметрический метод позволяет определять концентрацию оптически активных веществ в растворах. К оптически активным органическим веществам относятся глюкоза, сахараза, фруктоза, крахмал, аминокислоты и др. Эти вещества обладают свойством отклонять плоскость поляризации проходящего через их растворы поляризованного луча.

Угол поворота плоскости поляризации измеряют с помощью оптических приборов – поляриметров (рисунок 1). Наибольшее распространение получили поляриметры-сахариметры СУ-2 и СУ-1 с нормальной сахарной шкалой.

1 – винт; 2 – окуляр; 3 – лупа; 4 – поляриметрическая трубка;

5 – камера; 6 – поляризатор; 7 – осветительный узел; 8 – трансформатор

Рисунок 1 – Поляриметр СУ-2

Схема устройства оптической системы поляриметра представлена на рисунке 2. Поляриметр состоит из двух поляризационных призм Николя, установленных таким образом, что плоскости их главных сечений взаимно перпендикулярны. Между призмами размещается трубка с раствором оптически активного вещества. Ближайшая к источнику света призма (поляризатор) служит для поляризации световых лучей, вторая (анализатор) – для компенсации угла вращения плоскости поляризации.

1 – светофильтр; 2 – двояковыпуклая линза; 3 – поляризатор;

4, 8 –диафрагмы; 5, 7 – защитные стекла; 6 – трубка с испытуемым

раствором; 9 – кварцевый компенсатор; 10 – анализатор;

11 – зрительная трубка (2 объектива и окуляр)

Рисунок 2 – Оптическая схема поляриметра

При отсутствии раствора в трубке поляризационный свет через анализатор не пройдет, и будет наблюдаться полная темнота; при наличии раствора в анализаторе можно видеть свет, ослабленный по сравнению с исходным. Яркость его тем больше, чем более концентрированный раствор.

Практически трудно отличить полную темноту от очень слабого света.

В настоящее время используют полутеневые поляриметры, в которых устанавливают дополнительную призму, благодаря чему получаются два одинаковых полукруга. Для измерения концентрации вещества в растворе освещенность обеих половин выравнивают.

В полутеневом приборе обе призмы установлены неподвижно, а освещенность полей регулируется кварцевым компенсатором. Кварц является веществом, близким по оптическим свойствам к сахарозе. Таким образом, вместо измерения угла поворота анализатора измеряют толщину компенсирующей вращение кварцевой пластины. Величина угла вращения плоскости поляризации α при определенных условиях зависит от концентрации раствора. Для характеристики каждого оптически активного вещества вводится понятие удельного вращения [α] ^t_D, т.е. угла вращения, которым обладает раствор, содержащий в 100 см³ 100 г вещества при длине трубки 100 мм.

Угол вращения определяют обычно при 20 ^оС в монохроматическом свете.

Концентрацию раствора оптически активного вещества С (в г на 100 см³) находят по формуле (6):

, (6)

где l – длина трубки, мм;

[ α ] – удельное вращение оптически активного вещества.

Пользуясь сахариметром, можно определить процентное содержание сахарозы в сахаросодержащих продуктах. При анализе крахмалистых материалов вводят расчетный коэффициент исходя из величины удельного вращения крахмала и взятой на анализ навески. Поляриметр СУ-3 имеет линейно-эмпирическое устройство шкалы. Она градуирована по раствору химически чистой сахарозы, содержащему 26 г сахарозы в 100 мл дистиллированной воды. Такой раствор при поляризации в трубке длинной 200 мм при температуре 20 ^оС дает показания на условной шкале 100^о. Шкала разделена на 100 равных частей. Одно деление шкалы отвечает содержанию 0,26 г сахарозы. Такая шкала сахариметра является нормальной шкалой, а навеска сахарозы 26 г – нормальной навеской.

Поляриметр-сахариметр имеет две шкалы: основную и нониусную (рисунок 3). Целые градусы определяют по положению черты «0» нониуса по основной шкале, десятые доли по шкале-нониусу; угол вращения раствора находят по этим двум шкалам.

Перед началом работы проверяют нулевую точку прибора, т.е. освещенность поля при нулевом положении основной и нониусной шкалы – она должна быть одинаковой.

Рисунок 3 – Шкалы поляриметра

Затем заполняют поляриметрическую трубку так, чтобы в ней не оставалось пузырьков воздуха. Покровные стекла должны быть чистыми. Температура раствора 20 ^оС. Помещают трубку в камеру прибора. Поле поляриметра наблюдают через окуляр, компенсатор перемещают винтом до получения одинаковой освещенности поля зрения, показания отсчитывают по шкале.

Поляризационная трубка на 200 мм считается нормальной. При использовании трубок длиной 100 или 400 мм показания поляриметра увеличивают или уменьшают соответственно в 2 раза.

Дата добавления: 2015-08-06 | Просмотры: 924 | Нарушение авторских прав