АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Проведение анализа. Все пипетки, используемые при испытании, должны иметь ватные тампоны

Все пипетки, используемые при испытании, должны иметь ватные тампоны.

Для анализа берут 2 колбы. В них наливают по 40 мл 2 %-ного раствора картофельного крахмала (субстрат) и помещают в термостат с температурой 50 ± 0,5 ^оС. Выдерживают 5…10 минут, одновременно выдерживают в термостате рабочий раствор фермента.

К раствору крахмала добавляют 20 мл рабочего ферментного раствора, доведенного до той же температуры, перемешивают и выдерживают при 50 ^оС 30 минут. По истечении этого времени колбу с содержимым вынимают из термостата и добавляют в нее 2 мл термостатированного 1 н раствора соляной кислоты для инактивации фермента. Для осаждения белков и осветления приливают 2 мл 30 %-ного раствора сульфата цинка, а после перемешивания – 2 мл раствора гексациано-(II)-ферроата калия (K₄Fe(CN)₆) (15 %-ного).

Одновременно готовят контрольный раствор. Для этого в другую колбу наливают последовательно 20 мл ферментного раствора, 2 мл 1 н раствора соляной кислоты, по 2 мл растворов сульфата цинка и гексациано-(II)-ферроата калия и 40 мл субстрата.

Содержимое обеих колб фильтруют. В фильтратах (контрольном и испытуемом) определяют поляризацию на сахариметре любой марки в поляризационной кювете длиной 200 мм. После измерения получают значения поляризации: Пк (контрольный раствор) и По (исследуемый, опытный раствор). Разность между значениями величины угла вращения плоскости поляризации контрольного и исследуемого растворов (ΔП) показывает снижение степени поляризации, которое пропорционально количеству образовавшихся в процессе ферментативной реакции низкомолекулярных углеводов.

Значение ΔП должно быть не менее 0,2^о и не более 2,5^о при определении на поляриметрах с нормальной сахарной шкалой.

Осахаривающую активность (ОС_п, ед./г) определяют по уравнению (7)

(7)

где а – масса солода в реакционной среде, мг;

0,050 и 0,0114 – постоянные коэффициенты, выведенные на основе экспериментальных данных.

Допустимые отклонения в параллельных определениях должны составлять не более 1,0 %.

При анализе концентрированных препаратов и поверхностных культур плесневых грибов применяют формулу (8)

(8)

где а – масса ферментного препарата в реакционной среде, мг,

при анализе глубинной культуры формулу (9)

(9)

где V – количество ферментного препарата в реакционной среде, мл,

0,051; 1; 0,0102 – постоянные коэффициенты, выведенные на основе экспериментальных данных.

Дата добавления: 2015-08-06 | Просмотры: 503 | Нарушение авторских прав