АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Определение активности пероксидазы

Прочитайте:
  1. C. повышение цитотоксической активности Т-лимфоцитов
  2. E. повышение ферментативной активности лизосом
  3. E. снижения активности фермента глутатионпероксидазы
  4. I. Определение верхушечного толчка.
  5. I.1. Определение понятия
  6. II) Энзимологическое определение количества метаболитов.
  7. III. Виды реактивности
  8. IV. Роль реактивности организма в возникновении и развитии опухолевого процесса.
  9. IV.1. Дыхательная недостаточность. Определение понятия
  10. А) Определение силы неизвестного анатоксина по известной антитоксической сыворотке

 

Принцип метода метод основан на определении скорости реакции окисления бензидина под действием пероксидазы с образованием продуктов окисления определенной концентрации, заранее установленной на фотоэлектроколориметре.

Ход работы. В две кюветы шириной 2 см фотоэлектроколориметре наливают по 2 мл ферментного раствора, 2 мл раствора бензидина в ацетатном буфере, содержимое перемешивают. Измерения проводят при длине волны 600–650 нм. Вначале устанавливают стрелку гальванометра в крайнее правое положение (например, 0,125 или 0,250). После этого в контрольную (левую) кювету наливают 2 мл воды, а в правую (опытную) – 2 мл 3%–ного раствора перокида водорода. С внесением первой капли перекиси водорода включают секундомер. При этом под действием пероксидазы происходит реакция окисления бензидина с образованием соединения синего цвета, и стрелки гальванометра начинают отклоняться к нулевому положению. Секундомер останавливают, когда стрелка гальванометра достигает нулевого деления. Активность фермента А вычитают по скорости реакции и выражают в условных единицах на 1 г растительного материала по следующей формуле:

 

D . (V - b)

Еn= ¾¾¾¾¾, (3)

n . c . t

где Еn – активность фермента на 1 г навески;

D – экстинкциях (0,125 или 0,250);

V – объем вытяжки, мл;

b – степень разведения вытяжки в кювете (3);

n – навеска растительного материала, г;

с – толщина слоя жидкости в кювете (2 см);

t – время, с.

Материалы и реактивы: ферментный раствор (см. Приложение В, п.10); 3%–ный раствор перекиси водорода; раствор 0,005 М бензидина на фосфатном буфере с рН 7,0.

Оборудовани: пипетки на 2 мл;кюветы; ФЭК; секундомер.

 

Дата добавления: 2015-08-06 | Просмотры: 825 | Нарушение авторских прав


1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 |

При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.002 сек.)