АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Реакции преципитации

Реакции преципитации (РП) [от лат. praecipito, осаждать] предложены Краусом (1897) и основаны на фенЏмене образования видимого осадка (преципитата) или общего помутнения среды после взаимодействия растворимых либо находящихся в коллоидном дисперсном состоянии Аг с АТ. РП ставят в специальных узких пробирках. В качестве реагентов используют гипериммунные преципитирующие сыворотки с высокими титрами АТ к гомологичным Аг. При постановке РП разводят не сыворотку, а Аг. Реакционная среда должна содержать электролиты (физиологический раствор) и иметь нейтральный рН. РП позволяет быстро (в течение нескольких секунд) выявлять незначительные количества Аг. Они очень чувствительны, и их применяют для тонкого иммунохимического анализа, выявляющего отдельные компоненты в смеси Аг. Метод имеет несколько разновидностей (рис. 10 – 16).

Ы Вёрстка. ВВести рисунок 10–16

Рис. 10 – 16. Выявление АГ в реакции преципитации. Схемы реакций кольцепреципитации (А) и диффузии в геле (Б). Пояснения в тексте.

Реакция кольцепреципитации. На слой антисыворотки наслаивают жидкость, содержащую растворимый Аг, и через несколько секунд наблюдают образование кольца преципитата (рис. 10 – 16, А). Широкое распространение получила реакция термопреципитации АскЏли на Аг возбудителя сибирской язвы, использующая Аг, экстрагированные кипячением из различного сельскохозяйственного сырья. Реакцией кольцепреципитации также выявляют АТ к бруцеллам в молоке (кольцевая проба Банга).

Реакция микропреципитации. Для выявления низких титров АТ (например, при сенсибилизации к ЛС) применяют нефелометрическую реакцию микропреципитации (или реакция помутнения), предложенная УаньЌ (1955). При её постановке в исследуемую сыворотку крови вносят Аг в убывающей концентрациях; при отсутствии АТ разведение сыворотки крови Аг уменьшает её оптическую плотность. Однако в присутствии минимальных количеств АТ образуются микропреципитаты, повышающие оптическую плотность среды.

Реакция флоккуляции [от лат. floccus, хлопья шерсти] — РП в системах токсин-антитоксин и анатоксин-антитоксин, проявляющиеся появлением хлопьевидного осадка или опалесценции при избытке Аг. Реакции возможны только с лошадиными (но не с кроличьими) антитоксическими сыворотками или антитиреоглобулиновыми человеческими антисыворотками. Механизм реакции обусловлен растворимостью и авидностью АТ. Реакцию обычно применяют для определения активности антитоксинов.

РП в геле (рис. 10 – 16, Б). Широкое распространение получили модификация РП — РП в геле; методически они отличаются от РП тем, что преципитирующая сыворотка уплотняется добавлением геля (агар, агароза, карбоксиметилцеллюлоза и др.). Известны простая одномерная иммунодиффузия (по Удену), двойная (встречная) одномерная иммунодиффузия, радиальная иммунодиффузия (по МанчЋни) и двойная (встречная) радиальная иммунодиффузия (по ОухтерлЏни). Методы простой диффузии основаны на способности Аг, внесённого в лунки, диффундировать в гель. При постановке реакций двойной диффузии АТ и Аг вносят в отдельные лунки. Обычно методы используют для выявления белковых Аг в различных жидкостях и тканевых экстрактах. Вариантом простой одномерной иммунодиффузии является тест Илека для выявления токсинообразования у возбудителя дифтерии.

Иммуноэлектрофорез. Метод объединяет РП в геле с электрофорезом. Для этого слой агара наносят на предметное стекло; на его разных краях вырезают две лунки, а в центре — разделяющую их канавку. В лунки вносят смесь Аг и проводят электрофорез в течение 1–2 ч. Различные Аг с разной скоростью перемещаются между катодом («старт») и анодом («финиш»). Затем в канавку вносят преципитирующую сыворотку и через 5–7 сут в геле образуются зоны преципитации. Для лучшей визуализации агар окрашивают красителями (например, амидочёрным). Более информативный и быстрый — метод встречного иммуноэлектрофореза (электросинерез). Его принцип основан на контакте Аг и АТ, обусловленном не их свободной диффузией, а эффектом постоянного электрического поля, усиливающего способность к взаимодействию низкореактогенных Аг и АТ. Основное условие для применения метода — наличие электрофоретической подвижности Аг, отличной от таковой у АТ. Основные достоинства метода — высокая чувствительность, в 10 раз превышающая чувствительность метода двойной иммунодиффузии; возможность идентификации Аг, не выявляемых методом диффузии, и скорость — результаты можно учитывать через 1–3 ч.

Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 650 | Нарушение авторских прав