Хід роботи. 1.Чисте предметне скельце швидко занурити в розчин формвара, через 5-10 с скло витягти та підсушити (сушити слід 40-60 с до зникнення запаху розчинника)
1.Чисте предметне скельце швидко занурити в розчин формвара, через 5-10 с скло витягти та підсушити (сушити слід 40-60 с до зникнення запаху розчинника). Плівку, що утворилася на склі, можна виявити, якщо подихати на скло (рис. 5.4.).
2. Отриману плівку підрізати лезом бритви, потім зняти плівку на воду (скло повільно занурити у воду під кутом 450). На плівку викласти сітки і зняти їх за допомогою фільтрувального паперу. Сітки з плівкою висушуються та зберігаються в чашках Петрі.
3. На сітку з плівкою нанести краплю суспензії вірусних часток. Рідину відбирають фільтровальним папером через 30-60 с, сітку висушують.
4. На сіточку нанести краплю контрастуючої речовини і через 1 хв відбирають рідину; після просушування препарат готовий для дослідження.
5. Дослідити препарати в електронному мікроскопі.
6. Визначити розміри вірусних часточок за допомогою отриманих електронномікроскопічних знімків.
За допомогою лінійки виміряти довжину та діаметр вірусних часточок на електронній мікрофотографії. Визначити середнє значення. Порівняти отримане число з лінійкою в кутку фотографії (в 1 см кількість нанометрів). Визначити розміри часточок в нанометрах.
Рис.5.4. Приготування плівок-підкладинок з формвару.
1- предметне скельце; 2 – стаканчик з розчином формвару.
Контрольні завдання:
- Приготування плівок-підкладинок з формвару.
- Негативне контрастування препарату вірусу.
- Приготування препататів для електронної мікроскопії.
- Обрахунок розмірів вірусних часточок (по фото).
- Будова електронного мікроскопу;
- Схема приготування плівок підкладинок з формвару.
Контрольні запитання.
1. Мета використання електронної мікроскопії у вірусології.
2. Порівняти розподільчу здатність світлових мікроскопів з такою електронних мікроскопів.
3. Що дозволяє отримувати більшу розподільчу здатність в електронній мікроскопії?
4. Формування зображення в трансмісійному електронному мікроскопі.
5. Чим обумовлена необхідність контрастування вірусів для досліджені в ЕМ?
6. Розподільча здатність електронного мікроскопу.
7. Методи приготування препаратів.
8. Як обраховують розміри вірусів за електронномікроскопічними зображеннями?
Список літератури.
1. Вирусология. Методы. Под ред. Меихи Б.М. М.:Мир, 1988.- 344с.
2. Миронов А.А., Комиссарчик Я.Ю., Миронов В.А. Методы электронной микроскопии в биологии и медицине. С-П., Наука, 1994г.- 398с.
3. Практикум із загальної вірусології / за ред. А.Л. Бойка. –К.: Видавничий центр „Київський університет”, 2000. -269 с.
4. Практикум по общей вирусологии. Под ред. Атабекова И.Г.- М.: Университет, 1980.-191с.
5. Троценко Н.И., Белоусова Р.В., Преображенская Э.А. Практикум по ветеринарной вирусологии.- 2-е изд., перераб. и доп. –М.: Колос, 2000.- 272 с, ил.
6. S.J. Flint et al. Principles of Virology. N-Y, ASM Press, 2000.-579рр.
7. A.J. Cann. Molecular Virology. London, Academic Press, 2001.-395рр.
Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 544 | Нарушение авторских прав
|