|
АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология
|
Ключевые слова и понятия. Белок-репрессор Генетическая карта Гетеродуплекс Двухфакторное скрещивание Индукция профага Конкатемер Концевая избыточность
| Белок-репрессор
Генетическая карта
Гетеродуплекс
Двухфакторное скрещивание
Индукция профага
Конкатемер
Концевая избыточность последовательности ДНК
Лизогенизация
Липкие концы
Литический путь
Морфогенез фага Т4
Мутации amber, ochre, opal
| Мутации clear фага λ
Неселективный маркер
Низкая отрицательная интерференция
Одиночный цикл развития фага
Профаг
Селективный маркер
Супрессорчувствительные мутации
Температурочувствительные мутации
Трехфакторное скрещивание
Физическая карта
Циклическая перестановка (пермутация)
последовательности ДНК
|
Задачи
7.1. В таблице представлены результаты комплементационного теста между различными температурочувствительными фаговыми мутантами; «+» означает присутствие негативных колоний при непермиссивной температуре. Распределите мутации по группам комплементации.
| 7.2, Определите условия эксперимента при постановке теста на комплементацию между следующими парами условно летальных мутаций фага: a) amber, amber;
б) amber, ochre;
в) теплочувствительная, теплочувствительная;
г) холодочувствительная, холодочувствительная;
д) amber и теплочувствительная;
е) теплочувствительная, холодочувствительная.
7.3. Перечислите пермиссивные и непермиссивные условия для каждой из мутаций и селективные маркеры при постановке трехфакторных скрещиваний в следующих комбинациях мутантов:
|
7. Геном вируса 223
a) amber, amber, температурочувствительная;
б) opal, температурочувствительная, температурочувствительная;
в) ochre, ochre, amber;
г) морфология негативных колоний, amber, температурочувствительная;
д) ochre, opal, морфология негативных колоний;
е) специфичность к хозяину, специфичность к хозяину, размер негативных колоний.
7.4. Проведены двухфакторные скрещивания между четырьмя температурочувствительными мутантами. Цифры в таблице означают долю рекомбинантов дикого типа в потомстве при культивировании при 40°С. Определите последовательность генов на генетической карте.
7.5. Проведены скрещивания температурочувствительных мутантов мелкого фага с кольцевым геномом. Проанализируйте таблицу и постройте карту хромосомы фага.
7.6. На мутантах мелкого фага были поставлены два указанных ниже трехфакторных скрещивания. Считайте, что селективные маркеры всегда теснее сцеплены по сравнению с неселективными.
| Постройте карту последовательности мутантных генов.
7.7. Были поставлены следующие трехфакторные скрещивания. Принимая предположение, которое было сделано в условии задачи 7.6, определите последовательность генов на генетической карте.
7.8. На мутантах мелкого фага были поставлены следующие трехфакторные скрещивания. Принимая предположения, сделанные в условиях двух предыдущих задач, постройте карту последовательности генов.
|
224 Организация и передача генетического материала
7.9. Для изучения комплементации между различными мутациями у фагов часто определяют разницу в их урожае в пермиссивных и непермиссивных клетках при смешанной инфекции. Проанализируйте таблицу и распределите мутации по комплементационным группам.
7.10, ф105-это умеренный фаг; его хозяином является бактерия Bacillus subtilis. Фаговые частицы дикого типа образуют мутные негативные колонии при температуре как 30, так и 40°С. В двухфакторных скрещиваниях было картировано несколько температурочувствительных мутаций. Указанные в таблице цифры соответствуют доле (%) рекомбинантов дикого типа в соответствующих скрещиваниях, проведенных при температуре 40°С. Постройте по этим данным генетическую карту.
Мутант cc1 образует при обеих температурах прозрачные негативные колонии, а мутант с4 дает мутные негативные колонии при 30°С и прозрачные при 40°С. По представленным ниже данным постройте генетическую карту фага φ 105, включающую уже построенную ее часть.
| 
По Rutberg L (1969). J. Virol., 3, 38.
7.11. Проводили приведенные ниже трехфакторные скрещивания и каждый раз отмечали преобладающий генотип по неселективному маркеру. Во всех скрещиваниях селективные маркеры были теснее сцеплены друг с другом, чем каждый из них с неселективным (сцепленность предварительно определяли в двухфакторных скрещиваниях). Определите последовательность мутантных генов на генетической карте.
7.12. Клетки Е. coli, лизогенные по фагу λ, устойчивы к нему и не могут быть инфицированы этим же фагом λ. Однако возможно одновременное инфицирование чувствительных клеток двумя фагами λ с различными генотипами; получаемые при этом клетки называются
|
7. Геном вируса 225
| двойными лизогенами и содержат в генотипе оба профага. Двойная инфекция фагами λ и λcI приводит к образованию лизогенов, содержащих оба профага, тогда как фаг λсI сам по себе никогда не лизогенизирует клетку даже в присутствии «хелпера» λсI+ во время инфекции. Опишите схематически возможную последовательность событий, приводящую к такой двойной лизогении. Что вы можете сказать относительно продукта гена сI+?
| 7.13. Первые генетические исследования фага λ относились к мутациям, изменяющим размер или морфологию негативных колоний. Вот некоторые из этих мутаций: s (small, мелкие бляшки), с (clear, прозрачные бляшки, а не мутные, впоследствии обозначенные символом cI), co1 и со2 (cocarde) прозрачные; в настоящее время для них приняты обозначения cIII и cII соответственно), mi (minute, очень мелкие бляшки, меньшие, чем у мутанта s). В таблице приведены данные по некоторым трехфакторным скрещиваниям этих мутантов. Постройте генетическую карту с указанием расстояний между соседними генами.
|
| |
| | По Kaiser A. (1957). Virology, 3, 42.
| |
7.14. Фаги λcΙΙ и λcΙΙΙ могут лизогенизировать клетки Е. coli в присутствии фагов хелперов λ + или λcI. Зная ответы на две предыдущие задачи, что вы можете сказать относительно cI, cII и cIII?
7.15. Все умеренные фаги лямбдоидного семейства обладают «липкими» концами. Большинство из них способно встраиваться в различные участки хромосомы хозяина и обладают иммунными свойствами, перечисленными ниже в таблице, где «+» означает успешное
| инфицирование, а «—» устойчивость к инфекции.
При смешанной инфекции некоторые лямбдоидные фаги могут обмениваться генами друг с другом. В прилагаемой таблице указывается присутствие рекомбинантов дикого типа с λ-иммунностью в потомстве от скрещивания различных мутантов фага λ с фагами дикого типа 434, 21 и 82. Какой из этих фагов наиболее близок фагу λ? Что вы можете сказать относительно генетического контро-
|
226 Организация и передача генетического материала
| ля иммунности и лизогенизации, судя по этой таблице и по трем предыдущим задачам?
7.16. В результате рекомбинации между фагом λ и фагом 434 иногда образуется гибридный фаг, в котором хромосома фага λ обладает иммунными свойствами фага 434. Такой рекомбинант обозначается символом λimm434; он спо-
| собен к росту на хозяине с профагом λ в геноме, но не на хозяине с профагом 434. Ген су локализован между геном О и участком, определяющим иммунные свойства. Для того чтобы определить порядок мутаций 2001 и 42 в гене су, были поставлены два скрещивания. Потомство высевали на Е. coli (λimm434Oam29). Каков порядок мутаций?
|
| | По Jones M.O., Herskowitz I. (1978). Virology, 88, 199.
|
7.17. Мутация фага λcαn1 делает возможной лизогенизацию мутантами λcΙΙΙ. Другими словами, λcIIIcαn1 образует мутные негативные колонии. λcαn+ можно отличить от λcαn1 при посеве на клетки Е. coli штамма WA8067: негативные колонии λcαn+ чуть более прозрачны, чем у λcan1. На основании приводимых ниже результатов скрещиваний определите положение сап1 относительно мутаций су, картированных в предыдущей задаче. Потомство высевали на Е. coli Su – (λimm4340am29).
По Jones M. 0., Herskowitz I. (1978). Virology, 88, 199.
7.18. Прерывание скрещивания путем искусственного лизиса клетки на той стадии, когда в ней содержится всего около десятка фаговых частиц, служит одним из способов демонстрации кольцевой структуры генетической карты фага Т4. Если лизис проходит нормально, каждая
| клетка содержит около 200 фагов-потомков, и уже невозможно наблюдать сцепление между сравнительно удаленными маркерами, а именно это необходимо для доказательства кольцевой структуры. Исходя из содержащегося в тексте главы обсуждения динамики скрещивания фагов, сформулируйте гипотезу, объясняющую эти наблюдения. Как должно было бы влиять на наблюдаемые частоты рекомбинации прерывание нормального лизиса клеток в соответствии с вашей гипотезой? Лизис клеток не происходит, когда оба родительских фага мутантны по соответствующему гену (е). Потомство фага может быть извлечено из клеток посредством искусственного лизиса.
7.19. Е. coli С служит нормальным хозяином фага дикого типа фХ174. У мутантного штамма Е. coli C1 поверхность клетки изменена так, что фаг фХ не может на ней адсорбироваться и соответственно не может расти и размножаться на штамме Е. coli C1. Двойной мутант фага фХ, обозначаемый символом НаНb, способен адсорбироваться на поверхности клеток штамма Е. coli C1 (равно как и на Е. coli С), инфицировать их и производить потомство. Когда клетки Е. coli С одновременно заражают фагом дикого типа и НаНb, некоторые фаговые частицы в потомстве могут инфицировать клетки Е. coli Cl однако их потомство уже лишено способности инфицировать клетки Е. coli C1. Объясните.
|
Дата добавления: 2015-12-16 | Просмотры: 637 | Нарушение авторских прав
|
