Таблица 11.4. Сборка РНК-полимеразы из субъединиц in vitro
Субъединицы
Включение [3Н] UTP в РНК при рестриктивной температуре (наномоли)1)
Дикий тип
ХН56
R120
A2R7
3,5
0,2
4,3
0,17
0,09
2,5
0,06
0,47
0,52
1,40
1) 1 наномоль = 10-9моль. Таблица составлена по данным Miller }. et al. 1976. In: RNA Polymerase, eds. R. Losick, M. Chamberlin, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., p. 519
11.5. Гены, кодирующие β- и ß'-cyбъeдиницы РНК-полимеразы E. coli, картируются очень близко друг от друга и транскрибируются в составе общей полицистронной мРНК. Ряд температурочувствительных штаммов, мутантных по области ßß', содержат РНК-полимеразу, которая после выделения и очистки проявляет при рестриктивной температуре аномальные свойства. Субъединицы очищенной РНК-полимеразы можно разделить, а после этого снова осуществить сборку фермента с восстановлением исходной активности. Эксперименты по сборке РНК-полимеразы из субъединиц проводили для того, чтобы установить, какие из субъединиц дефектны в ферментах, образуемых тремя мутантными штаммами (ХН56, R120 и A2R7). Из данных, приведенных в таблице 11.4, определите дефектную субъединицу в каждом из штаммов. 11.6. Антибиотики рифампицин и стрептолидигин убивают чувствительные клетки за счет ингибирования синтеза РНК. Изучение очищенной РНК-
полимеразы in vitro позволило установить, что рифампицин блокирует процесс инициации синтеза РНК, а стрептолидигин препятствует транслокации РНК-полимеразы по цепи ДНК и тем самым обрывает начавшийся синтез цепей РНК. Мутантные штаммы E. coli, устойчивые к одному из этих антибиотиков, образуют РНК-полимеразу, которая после очистки проявляет устойчивость к тому же антибиотику in vitro. При проведении экспериментов по сборке фермента из субъединиц подобно тому, как это описано в задаче 11.5, были получены данные, приведенные в таблицах 11.5 и 11.6. Определите, на какие субъединицы действуют вышеназванные антибиотики. 11.7. Некоторые эукариотические цитоплазматические мРНК не содержат полиаденилатного «хвоста». Это наиболее характерно для гистоновых РНК. Учитывая специфическую роль гистонов в цикле клеточного развития, предложите гипотезу относительно функциональной роли polyA-хвоста в структуре мРНК.