Рис. 11.20. Изображение радиоавтограммы, полученной после расщепления суммарной куриной ДНК рестриктазой EcoRI, электрофоретического разделения в агарозном геле, переноса по Саузерну и гибридиза-
ции с радиоактивными зондами, полученными на основе фрагментов OVL и OVR по отдельности и в смеси. (По Lai E. et al. 1978. Proc. Nat. Acad. Sei. USA 75, 2205.)
или иному из двух кДНК-зондов (рис. 11.20). Это может означать только то, что в истинный овальбуминовый ген входят участки последовательности, содержащие сайты узнавания для Eco RI, которые не включаются в последовательность мРНК. Эти четыре Eco RI-фрагмента отмечены на карте (рис. 11.17), построенной на основе серии аналогичных экспериментов с использованием набора различных рестриктаз для расщепления и сопоставления куриной геномной ДНК и овальбуминовой кДНК.
До того как было открыто существование интронов, процесс образования цитоплазматических мРНК представлялся достаточно неясным. Биохимические исследования ядерной РНК показали, что в ее состав входят молекулы значительно большего размера, чем молекулы цитоплазматических мРНК. РНК этого типа называется гетерогенной ядерной РНК (гяРНК). Было обнаружено, что большая часть гяРНК не попадает в цитоплазму, а подвергается деградации до нуклеотидов непосредственно в ядре. С помощью биохимических методов не удавалось установить, синтезируются ли в ядре молекулы мРНК в том виде, в котором они обнаруживаются в цитоплазме. Можно было предположить, что в ядре их не удается обнаружить просто из-за большого избытка гяРНК. В то же время представлялось весьма вероятным, что мРНК синтезируется в виде предшественников, входящих в состав гяРНК, а образование зрелых мРНК является результатом нуклеазного процессинга при выходе в цитоплазму. Решение проблемы было найдено благодаря тому, что были обнаружены внутренние некодирующие последовательности, входящие в состав некоторых структурных генов.
Размер транскриптов гена овальбумина, которые содержатся в ядрах клеток яйцевода, удалось определить с использованием высокорадиоактивных кДНК-зондов, полученных по овальбуминовой мРНК так, как