знаменной FCO. Эта мутация картируется в ß-цистроне недалеко от границы с A-цистроном (рис. 6.4). При росте FC0 -мутанта на пермиссивном хозяине E. coli В с относительно низкой частотой наблюдается возникновение спонтанных ревертантов, которые можно обнаружить по способности к бляшкообразованию на рестриктивном хозяине E. coli К (λ) (rII FCO ® rII<<+»Однако, как оказалось, большая часть этих «ревертантов» не являются истинными. Так, при совместной инфекции пермиссивных клеток псевдоревертантным и диким фагом (скрещивание 1, см. ниже) частота возникновения rII -мутантных фагов в потомстве значительно превышает частоту спонтанных мутаций к rII -фенотипу:
Скрещивание 1
Родители: rII<<+>> x rII + Потомство: rII +, rII и rII
Изучение дочерних rII -мутантных фагов, возникающих при скрещивании 1, показало, что они расщепляются на два класса, обозначенные здесь индексами α и β. Скрещивание 2 (см. ниже) показало, что мутанты класса α-это исходные F СО-мутанты, поскольку при рекомбинации между α и FCO в потомстве не обнаруживаются фаги с диким фенотипом. При скрещивании 3, напротив, происходит образование рекомбинантов дикого типа, то есть rIIβпредставляет собой новый класс мутаций, которые мы будем называть FC1.
Скрещивание 2: rII x rIIF CO
Результат: отсутствие rII+ -рекомбинантов Скрещивание 3: rIIβx rIIFC0
Результат: образование rII+ -рекомбинантов
На основании этих опытов можно заключить, что псевдоревертанты rII«+» являются не истинными ревертантами, а двойными мутантами типа FCO FC 1, имеющими дикий фенотип, т.е. способными формировать негативные колонии на E. coli К (λ). Мутация FC 1картируется в В-цистроне очень близко к FCO. Эти две мутации являются внутригенными и взаимно-супрессорными.
Аналогичным образом исследовали поведение новых rII -мутаций FC 1. При росте FC 1на пермиссивном хозяине также происходит спонтанное образование псевдоревертантов, которые, как показали аналогичные опыты по скрещиванию, оказались двойными rII -мутантами. Таким образом, псевдоревертанты FC 1содержат двойную мутацию FC1 FC2, причем возникшая новая FС2 -мутация и мутация FC1 — взаимные супрессоры. Многократно повторив аналогичные серии опытов, Крик и Бреннер получили целый ряд rII -мутантов этого типа: FC3, FC4, FC5 и т.д. Каждая из мутаций FC(n) сама по себе определяет обычный мутантный фенотип rII, и каждая мутация FC(n) способна к взаимной внутригенной супрессии с мутациями FC(n — 1) и FC(n + 1). При этом мутация FC(n) была выделена именно по способности обуславливать «реверсию» мутации FC(n — l); сама же мутация FC(n) «peвертировалась» под действием обнаруженной на следующем этапе мутации FC(n + 1). Рекомбинация между различными мутантами в серии FC позволяет получить различные варианты двойных мутантов. Фенотипические свойства сконструированных двойных мутантов приведены в табл. 12.3. Заметьте, что комбинация двух мутаций, из которых одна четная, а другая нечетная, приводит к проявлению дикого фенотипа