АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Рестрикция ДНК

Получить фрагмент геномной ДНК с целью последующего изучения можно путем рестрикции ДНК. Выделенная из клеток органов ДНК подвергается расщеплению рестрикционными эндонуклеазами (рестриктазами). Это ферменты бактериального происхождения, участвующие в распознавании чужеродных молекул ДНК и их уничтожении. Каждый такой фермент способен узнавать в любой двухцепочечной молекуле ДНК специфическую последовательность из 4-12 нуклеотидов. Такие последовательности часто являются палиндромными, т.е. последовательности нуклеотидов в них читаются в обоих направлениях одинаково. Две цепи ДНК разрезаются в участке узнавания или вблизи от него, причем цепи во многих случаях разрезаются не прямо друг против друга, а наискосок, образуя в результате «липкие» концы. Эти одноцепочечные концевые участки способны образовывать комплементарные пары оснований с любыми другими одноцепочечными концевыми участками, полученными с помощью того же фермента.

Известно более 500 различных типов рестриктаз, каждая из которых способна разрезать молекулу ДНК в определенном месте - сайте рестрикции. Длина рестрикционных фрагментов зависит от распределения сайтов в исходной молекуле ДНК: чем чаще расположены сайты, тем образующиеся фрагменты короче. В зависимости от частоты расположения сайтов рестрикции выделяют три класса рестриктаз: частощепящие, узнающие короткие специфические последовательности длиной в 4-5 нуклеотидов, среднещепящие, узнают последовательности 6-7 пар нуклеотидов, редкощепящие, узнают последовательности 8-12 пар нуклеотидов.

После обработки участка ДНК несколькими рестриктазами образуются рестрикционные фрагменты, и с помощью специального анализа можно определить расположение этих фрагментов относительно друг друга в молекуле ДНК, т.е. построить рестрикционную карту.

Рис. 1. Схема рестрикции ДНК

Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 1458 | Нарушение авторских прав