АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Гибридизация с ДНК-зондами

С помощью этого метода возможны идентификация специфических нуклеотидных последовательностей ДНК, определение положения гена, диагностика генных болезней, картирование хромосомных перестроек.

ДНК-зонд представляет одноцепочечную ДНК с известной последовательностью нуклеотидов длиной до 30 нуклеотидов. Зонд используется для поиска комплементарных последовательностей в молекуле большего размера.

Фрагменты исследуемой ДНК получают с помощью рестрикционных эндонуклеаз и путем электрофореза разделяют по относительной молекулярной массе в агарозном геле. ДНК в геле денатурируют, т.е. переводят в одноцепочечные формы и переносят на плотный носитель (фильтр). Фиксированную на этом носителе ДНК гибридизируют с радиоактивно меченным ДНК-зондом. Зонд связывается с комплементарным фрагментом ДНК. Положение этого фрагмента на фильтре определяют методом автографии (на рентгеновской пленке выявляют участок засветки).

Гибридизацию с ДНК-зондами проводят и на хромосомных препаратах (гибридизация in situ). Меченный флюорохромами ДНК-зонд наносят на препараты дифференциально окрашенных и приготовленных для гибридизации (денатурированных) метафазных хромосом. После специфической обработки препарата места хромосомной локализации последовательностей ДНК, комплементарных ДНК-зондам, выявляются в виде характерных светящихся участков.

Методы гибридизации с ДНК-зондами и амплификация (ПЦР) с последующим анализом образцов ДНК лежат в основе ДНКдиагностики наследственных заболеваний человека. Основная задача ДНК-диагностики - исследование генов с целью выявления мутаций.

Рис. 4. Схема гибридизации с ДНК-зондами

Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 1289 | Нарушение авторских прав