АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Гибридизация с ДНК-зондами

Прочитайте:
  1. Молекулярная гибридизация (метод молекулярных зондов)
  2. Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH)

С помощью этого метода возможны идентификация специфических нуклеотидных последовательностей ДНК, определение положения гена, диагностика генных болезней, картирование хромосомных перестроек.

ДНК-зонд представляет одноцепочечную ДНК с известной последовательностью нуклеотидов длиной до 30 нуклеотидов. Зонд используется для поиска комплементарных последовательностей в молекуле большего размера.

Фрагменты исследуемой ДНК получают с помощью рестрикционных эндонуклеаз и путем электрофореза разделяют по относительной молекулярной массе в агарозном геле. ДНК в геле денатурируют, т.е. переводят в одноцепочечные формы и переносят на плотный носитель (фильтр). Фиксированную на этом носителе ДНК гибридизируют с радиоактивно меченным ДНК-зондом. Зонд связывается с комплементарным фрагментом ДНК. Положение этого фрагмента на фильтре определяют методом автографии (на рентгеновской пленке выявляют участок засветки).

 

Гибридизацию с ДНК-зондами проводят и на хромосомных препаратах (гибридизация in situ). Меченный флюорохромами ДНК-зонд наносят на препараты дифференциально окрашенных и приготовленных для гибридизации (денатурированных) метафазных хромосом. После специфической обработки препарата места хромосомной локализации последовательностей ДНК, комплементарных ДНК-зондам, выявляются в виде характерных светящихся участков.

Методы гибридизации с ДНК-зондами и амплификация (ПЦР) с последующим анализом образцов ДНК лежат в основе ДНКдиагностики наследственных заболеваний человека. Основная задача ДНК-диагностики - исследование генов с целью выявления мутаций.

Рис. 4. Схема гибридизации с ДНК-зондами


Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 1223 | Нарушение авторских прав



1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 |



При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.003 сек.)