АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Молекулярная гибридизация (метод молекулярных зондов)

Прочитайте:
  1. ВОЛОКНИСТО-ПОРИСТЫЕ ПЕРЕВЯЗОЧНЫЕ МАТЕРИАЛЫ (ВППМ)НА ОСНОВЕ ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ ГЛИКАНОВ ЖИВОТНОГО И МИКРОБНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ
  2. Гетерогенность молекулярных форм пептидных гормонов
  3. Гибридизация с ДНК-зондами
  4. Дозы низкомолекулярных гепаринов (НМГ) для профилактики венозных тромбоэмболических осложнений
  5. Интегро-интерполяционный метод построения разностных схем (метод баланса).
  6. Классификация моногенных и мультифакторных заболеваний человека и их молекулярная основа
  7. Кондиционирование эмали (методика протравливания эмали)
  8. Молекулярная геномика
  9. МОЛЕКУЛЯРНАЯ ЭПИЗООТОЛОГИЯ. НАУЧНЫЕ ОСНОВЫ, МЕТОДЫ, ВОЗМОЖНОСТИ, ВНЕДРЕНИЯ.

Данный метод основан на способности двухспиралъной ДНК к денатурации и рснатурации. Денатурация- это расхождение цепей при нагревании ДНК до 80° - 100°с или обработке ее щелочью. Реставрация - воссоединение цепей с помощью водородных связей при снижении температуры до 40° - 60° (так называемый отжиг) и приобретение ДНК первоначальной двухспиралъной структуры.

Разъединенные цепи ДНК способны к гибридизации с фрагментами других однослиральных ДНК, имеющих комплементарные участки расположения нуклетидов. К гибридизации комплементарных нитей способна также РНК, образуя комплексы ДНК - РНК или РНК - РНК.

Необходимые для молекулярной гибридизации фрагменты ДНК иди РНК, с помощью которых выявляют наличие в исследуемом материале комплементарных нитей нуклеиновой кислоты, называются молекулярными зондами. Молекулярные зонды готовят из нуклеиновых кислот; выделенных из различных вирусов, иногда используют вирусную и-РНК, но чаще зондом служит клонированная рекомбинантиая ДНК. Имеются наборы молекулярных зондов для определения многих вирусов. Такие наборы клонированных фрагментов вирусных геномов составляют библиотеку или банк генов, они имеются в ряде стран и в том числе в России.

При постановке реакции молекулярной гибридизации зонды метят радиоактивной (Pj3), флюоресцентной или биотиновой меткой, соединяют с исследуемым материалом, содержащим определяемую нуклеиновую кислоту, подвергшуюся денатурации. Если зонд (фрагмент вирусного генома) комплементарен цепи определяемой нуклеиновой кислоты, происходит гибридизация в комплементарном участке.

После отжига зонд оказывается включенным в ренатурированную нуклеиновую кислоту и может быть обнаружен по имеющейся метке. Выявление наступившей молекулярной гибридизации позволяет установить природу определяемого вируса. Этот метод применяют в первую очередь для определения в клиническом материале персистирующих вирусов, при латентной вирусной инфекции, для выявления вирусов, которые не удается культивировать в культуре клеток. Молекулярная гибридизация -высокоспецифичный метод, ее чувствительность находится на уровне иммунохимических методов, например иммуно-ферментного анализа, а именно около 1(Г14 г/мл.

Еще более чувствительным (до 10"|8г), специфичным и довольно дешевым методом оказалась полимеразная цепная реакция.


Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 2173 | Нарушение авторских прав



1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 |



При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.003 сек.)