АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)

Как уже указывалось, гемагглютинирующими свойствами обладают многие вирусы, что позволяет выявить их в реакции гемагглютинацтии, но не дает возможность их индентифицировать.

Однако, если предварительно соединить вирус со специфической иммунной вируснейтрализующией сывороткой и уже потом добавить эритроциты, то такой инактивированный вирус теряет способность вызывать гемагглютинацию. Таким образом, вируснейтрализующая сыворотка оказыает тормозящее действие на реакцию гемагглютинации, и по отсутствию или наступлению РГА можно судить о том, произошла ли реакция нейтрализации между вирусом и сывороткой.

Эта реакция получила название реакции торможения гемагглютинации (РТГА), она обладает иммунологической специфичностью и может быть использована: а) для окончательной идентификации неизвестного гемагглютинируюшего вируса - по специфической диагностической сыворотке; б) для выявления титра неизвестных антител в сыворотке больного - по известным вирусным антигенам-диагностикумам.

Ингибиторы. Затрудняет применение РТГА наличие в

сыворотках крови человека и животных неспецифических вирусных ингибиторов, которые могут вызвать неспецифическое торможение гемагглютинации. Чтобы избежать искажения результатов РТГА, выпускают противовирусные диагностические сыворотки, освобожденые от ингибиторов.

При постановке РТГА с сыворотками больных следует пользоваться специальными ингибиторорезистентными вирусными диагностикумами или же освобождать сыворотки от ингибиторов путем прогревания при температуре 56-60°С, обработки нейраминидазой, трипсином, ацетоном, адсорбции ингибиторов каолином и т.п.

Реакцию торможения гемагглютинации ставят обычно на досках с лунками по методике, сходной с РГА. Основное отличие состоит в том, что в реакция наряду с вирусом и эритроцитами участвует еще сыворотка, с которой вирус предварительно выдерживают, и уже потом добавляют эритроциты.

Техника постановки РТГА (табл.8) с целью идентификации вируса гриппа рода А. На плексигласовой доске готовят три ряда двукратных возрастающих разведений (в объеме 0,25 мл) диагностических противогриппозных сывороток А(Н1 N1), A(H2N2) и A('H3N2) от 1:10 до 1:320 (до титра сывороток). Во все лунки, кроме контрольной, добавляют по 0,25 мл рабочей дозы вируса (разведение 1:40), в котором содержится 4 гемагглютинирующие единицы; доза была оттитрована в РГА.

После выдерживания реакции в течение 1 часа при комнатной температуре во все лунки добавляют по 0,5 мл 1% взвеси эритроцитов кур. Учет результатов проводят через 30-40 минут. В нашем примере торможение гемагглютинации произошло с сывороткой A(H3N2), следовательно, выделен вирус гриппа, принадлежащий к подтипу A(H3N2).

РТГА ставят и для определения наличия и титра антител в сыворотке больного. Для этого готовят последовательные двукратные разведения сыворотки в объеме 0,25 мл и соединяют их с 0,25 мл известного антигена (содержащего 4 гемагглютинирующие единицы), чтобы произошла нейтрализация вируса. Затем в пробирки вносят по 0,5 мл взвеси эритроцитов. За титр сыворотки принимают то наибольшее ее разведение, в котором еще наблюдается торможение гемагглютинации.

Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 1658 | Нарушение авторских прав