АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Выделение и культивирование вирусов путем заражения лабораторных животных

Методы заражения лабораторных животных с целью выделения и культивирования вирусов применяются значительно реже, чем культуры клеток и куриные эмбрионы. Тем не менее для ряда вирусных инфекций выявление возбудителя путем заражения животных имеет первостепенное значение (например, выявление вирусов Коксаки, бешенства, клещевого энцефалита). Следует отметить, что метод выделения вирусов путем заражения лабораторных животных был первым и долгое время единственным методом, с помощью которого удалось обнаружить целый ряд вирусов.

Экспериментальные модели. Восприимчивые к изучаемым вирусам животные называются эксперименгальной моделью. В качестве модели отбирают животных, обладающих видовой чувствительностью и высокой восприимчивостью к определенным вирусам.

Взятые в опыт животные должны быть одного вида, определенного возраста и содержаться в одинаковых условиях,

экспериментального животного существенно влияет на воспроизведение инфекции. Например, при заражении вирусами Коксаки используют мышей-сосунков семидневного возраста, которые более восприимчивы к этим инфекциям нежели 3-4-недельные мыши.

Необходимым условием успешного выделения вирусов является использование животных, свободных от латентных (скрытых) инфекций вирусной, бактериальной или протозойлой этиологии, которые нередко встречаются у многих видов лабораторных животных. К таким заболеваниям относятся вирусные пневмонии, вирусный энцефаломиелит белых мышей, протозойный энцефалит многих млекопитающих и птиц и др.

Для вирусологической работы чаще всего используют так называемые "чистые линии" экспериментальных животных. Они обладают однотипной наследственностью, имеют минимальное число латентных инфекций, обладают высокой восприимчивостью к вирусам. Особенно чувствительны к вирусам животные-гнотобионты. Работу с животными рекомендуется проводить в настольном боксе или в специальной операционной вивария. Все отходы и трупы погибших животных автоклавируют и сжигают, (см. граф 5, стр. 43).

Методы и техника заражения животных. Лабораторных животных заражают различными вируссодержащими материалами, взятыми от больных людей, от павших и забитых животных и т.п. Исследуемый материал должен быть взят с учетом патогенеза данного вирусного заболевания и тропизма возбудителя.

Способы заражения лабораторных животных, применяемые при вирусологических исследованиях в основном такие же, как при

заражении другими инфекционными материалами. Применяют подкожное, накожное, внутрикожное, внутримышечное, внутрибрюшинное, внутривенное, пероральное, интраназальное, интрацсребральное заражение и др. Выбор способа заражения животных проводят с учетом тропизма исследуемого вируса к определенным тканям,

Ниже приводятся два метода заражения - интраназальное (в нос) и интрацеребральное (в мозг), которые имеют некоторые

особенности.

Интраназальное заражение. Этот метод используют для выделения пыевмотропных (респираторных) вирусов. Заражение мышей проводится под эфирным наркозом.

Животных помещают под стеклянный колпак или в закрытую стеклянную банку, в которую положен кусок ваты, пропитанный эфиром. Эфир следует давать в значительной дозе в течение сравнительно короткого срока для создания непродолжительного, но глубокого сна. Показателем достаточности наркоза является глубокое, ритмичное дыхание животного, отсутствие кашлевых толчков во время заражения.

Объем заражающего материала для мышей 0,03-0,1 мл, его вводят с помощью шприца или пастеровской пипетки в ноздри животного.

Иптраназальный метод заражения животных можно осуществить также путем аэрозольного способа введения материала. Для этого подопытное животное помещают в специальную камеру, в которой распыляют исследуемый вируссодержащий материал. За зараженными животными устанавливается наблюдение, при появлении признаков заболевания мышей забивают при помощи эфирного наркоза, а затем вскрывают.

Этапы вскрытия животных. Для выделения респираторных вирусов вскрытие проводят в следующем порядке:

1. Увлажненный 5% раствором лизола или фенола труп
мыши фиксируют на простерилизованной поверхности (обычно
это кювета со смесью воска и парафина) брюшком вверх.

2. Обрабатывают кожные покровы спиртом, йодом и вновь
спиртом; опаливают пламенем.

3. Ножницами делают продольный разрез кожи от нижней
челюсти до лобка и боковые разрезы к лапкам, отсеиаровьгвают ее.

4. Вскрывают трудную полость, вырезав грудину
ножницами по реберным хрящам.

5. Осматривают внешний вид органов грудной полости,
обращая внимание на наличие эксудата. Извлекают легкие при
строгом соблюдения асептики и сохраняют их при минусовой
температуре в морозильнике до получения ответа на
бактериологический контроль-результат посева кусочка легочной
ткани в мясо-пелтонный бульон (после выдерживания его в
термостате при 37 °С в течение суток).

6. При отрицательном контроле на бактериальную
загрязненность готовят 10% суспензию легочной ткани путем
растирания ткани в фарфоровой ступке, с постепенным
добавлением физиологического раствора.

7. Суспензию центрифугируют для осаждения крупных
частиц при 1500 об/минут, надосадочную жидкость собирают и
используют для последующего вирусологического исследования.

Интрацеребральное заражение. Этот метод предназначен для выделения нейротропньх вирусов.

При заражении мыши в мозг ее плотно прижимают левой рукой к столу, большим и указательным пальцами оттягивают кожу головы к затылку, мизинцем и безымянным фиксируют хвост. Лобный участок головы предварительно обрабатывают 3% йодной настойкой. Заражающий материал (кровь) в объеме 0,02-0,03 мл вводят в мозг туберкулиновым шприцем с тонкой иглой, снабженной предохранительной муфтой, путем прокола лобной кости на глубину 1,5-2 мм. Материал вводят постепенно, чтобы не было резкого повышения внутреннего давления.

Этапы вскрытия животных. Для выделения нейротропных вирусов вскрытие животных осуществляют в следующей последовательности:

1. Труп увлажняют раствором лизола или фенола.

2.Обрабатывают кожные покровы головы последовательно спиртом, йодом и вновь спиртом, опаливают пламенем.

3.Вскрывают и отделяют кожу головы. Отрезают голову, помещают ее в стерильную чашку Петри, проведя предварительно через пламя горелки.

4.Вскрывают ножницами черепную коробку, извлекают мозг сохраняют его в замороженном состоянии до получения результата бактериологического контроля.

5.В случае отрицательного бактериологического контроля из мозговой ткани приготавливают 10% суспензию в физиологическом растворе. Освобождают ее от крупных тканевых частиц центрифугированием, надосадочную жидкость используют для вирусологической работы.

Первичное заражение лабораторных животных вирусе од ержащим материалом не всегда приводит к развитию экспериментальной инфекции. При многих вирусных инфекциях возможны так называемые "слепые" пассажи, при которых наличие вируса выявить не удается.

После 4-5 таких пассажей через организм восприимчивого животного, вирус приобретает способность вызывать заболевание. При этом в соответствующих тканях вирус накапливается в достаточном количестве, что позволяет провести его идентиф икацию.

На лабораторных животных проводят титрование вирусов, ставят реакцию нейтрализации; животных используют для получения вирусных вакцин, диагностикумов, противовирусных сывороток.

Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 2904 | Нарушение авторских прав