АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Цветная проба

Цветная проба (или цветная реакция) основана на разнице в цвете среды с индикаторам фенолрот, в которой растет нормальная, жизнеспособная культура клеток, и среды, где находится культура, зараженная вирусом.

В процессе развития нормальной культуры клеток происходит постепенное накопление кислых продуктов обмена веществ, что приводит к сдвигу рН в кислую сторону. Такое изменение реакции среды говорит о наличии роста и размножения клеток. Среда о индикатором фенолрот, первоначально имевшая красный цвет (исходное значение рН 7,4-7,6), вследствие снижения рН до 7,0-6,8 приобретает желтый цвет.

Заражение культуры клеток вирусом приводит к развитию в ней дегенеративных процессов: происходит подавление процессов метаболизма, значительно понижается гликолиз, в результате чего кислых продуктов накапливается мало, рН среды остается на исходном уровне и среда с индикатором фенолрот остается красного цвета.

Так, по сохранению красного цвета среды или переходу его в желтый можно судить о наличии или отсутствии вируса в исследуемом материале, внесенном в культуру клеток.

С помощью цветной реакции можно определить соответствие вируса и вируснейтрализующей сыворотки, если их предварительно смешать и эту смесь после инкубации внести в культуру клеток. Специфическая сыворотка нейтрализует вирус и он не оказывает цитопатическое действие на клетки культуры. Поэтому клетки продолжают нормально жить и размножаться, что приводит к переходу среды в желтый цвет.

Таким образом, цветную реакцию используют:

1) для выявления вируса и его титрования;

2) с целью идентификации вируса по нейтрализующему
действию специфической сыворотки;

3) для обнаружения и титрования вирус нейтрализующих
антител в исследуемых сыворотках.

Цветная проба получила широкое применение в диагностике полиомиелита при инфекциях, вызываемых вирусами Коксаки А и В. ECHO, аденовирусами и некоторыми арбовирусами.

Условия постановки. Цветную пробу ставят с различными типами клеточных культур. Чаще берут первичную культуру клеток почки обезьяны или перевиваемые культуры клеток.

Оценка результатов цветной пробы проводится по изменению цвета среды через определенный срок культивирования клеток,

При постановке цветной реакции необходимо учитывать, что каждая культура клеток, о которой ставят реакцию, имеет опреде­ленный уровень метаболизма. Поэтому постановке цветной пробы обязательно предшествует определение метаболической активности клеток культуры, о которой собираются ставить цветную реакцшо. Устанавливают так называемую дозу клеток для цветной реакции, то есть то оптимальное количество клеток, которое должно быть взято в каждую пробирку.

Определение дозы клеток. При работе с культурой почечных клеток обезьяны готовят взвесь клеток густотой 100-120 тыс. в 1 мл. Из нее делают ряд возрастающих двукратных разведении в объеме 0,25мл и определяют минимальное количество клеток, которое при постановке цветной пробы изменяет цвет питательной среди из красного в желтый на 5-6-й день выдерживания в термостате; это количество и принимается за дозу клеток. Обычно эта доза - 25 тыс. клеток в объема 0,25 мл.

На воспроизводимость результатов цветной пробы, кроме типа применяемых клеток и их концентрации, влияют также состав, буферность, рН питательной среды.

Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 7765 | Нарушение авторских прав