АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Культивирование вирусов в развивающихся куриных эмбрионах

Культивирование вирусов в куриных эмбрионах широко применяется в вирусологии как для первичного выделения вирусов из инфекционного материала, так и для дальнейшего их культивирования путем пассажей. Метод культивирования вирусов в куриных эмбрионах используют при лабораторной диагностике вирусных инфекций и в научных исследованиях. С помощью этого метода получают большое количество вируссодержащего материала для изготовления вакцин и диагностических препаратов.

Выявлено, что многие вирусы, поражающие человека и животных, могут в большей или меньшей степени размножаться в курином эмбрионе. Наличие плотной скорлупы защищает эмбрион от попадания микроорганизмов из внешней среды и, таким образом, вирусы размножаются в стерильных условиях. Как правило., у эмбрионов отсутствуют латентные вирусные инфекции, что выгодно отличает их от лабораторных животных.

Из недостатков этого метода наиболее значительны следующие: 1) невозможно наблюдать в динамике за патологическими изменениями, происходящими в эмбрионе после заражения его вирусом; 2) при вскрытии эмбриона, зараженного вирусом, часто не обнаруживается видимых изменений и приходится выявлять наличие вируса в тканях в жидкостях эмбриона, пользуясь другими вирусологическими методами (например, реакцией гемагглютинации); 3) невозможно проследить за нарастанием титра антител, что хорошо выявляется в опытах на животных; 4) метод культивирования в куриных эмбрионах пригоден не для всех вирусов, т.е. не является вполне универсальным.

Несмотря на имеющиеся недостатки, метод культивирования вирусов в куриных эмбрионах сравнительно прост, удобен и дешев и широко используется в вирусологических исследованиях. Наибольшее значение он имеет при работе с ортомиксовирусами, герпесвирусами, поксвирусами.

Строение куриного эмбриона. Куриный эмбрион покрыт известковой оболочкой - скорлупой, к которой изнутри примыкает скорлупная оболочка. В тупом конце яйца она раздваивается и заключает в себе воздушное пространство. Под скорлупкой оболочкой находится хорионаллантоисная оболочка, в тупом конце яйца она проходит по внутренней стороне скорлупной оболочки, замыкающей воздушное пространство. Эта оболочка богата кровеносными сосудами и служит эмбриону органом дыхания. Изнутри к ней прилегает аллантоисная полость, которая является органом выделения и защищает зародыш от высыхания и травм.. Аллантоисная полость окружает зародыш, находящийся в полости амниона, которая наполнена околоплодной жидкостью. Через желточный канатик зародыш соединен с желточным мешком -основным источником питательных, веществ.На поздних этапах развития эмбрион получает питательные вещества и из белочного мешка, расположенного в остром конце яйца.

Подготовительная работа. Для успешного

культивирования вирусов в организме развивающихся куриных эмбрионов требуется определенный температурный режим /обычно 36-38 ° С. 'влажность /50-70 %/, а таюке достаточная вентиляция. Заражают куриные эмбрионы определенного возраста, инкубированные от 6 до 13 дней в зависимости от вида вирусов и метода заражения. Должен быть выбран правильный метод заражения и подобрана оптимальная заражающая доза вируса в соответствии со свойствами вируса и задачами исследования, все операции по заражению и вскрытию яиц необходимо проводить с соблюдением асептики, желательно в боксе.

Для работы должны быть подготовлены: подставка для яйца, пузырьки со спиртом и йодом, пробирка со стерильным парафином, покровные стекла, пакетики стерильной ваты, марли, завернутая в бумагу стерильная посуда; стерильные шприцы, иглы, пинцеты, препаровальные иглы. Инструменты помещают в стаканчик со спиртом, где они находятся в течение всей работы, перед каждой манипуляцией их дополнительно стерилизуют обжиганием в пламени горелки. Руки перед работой тщательно моют, рекомендуется надеть маску из марли.

Для работы отбирают жизнеспособные эмбрионы, просвечивая инкубированные яйца в овоскопе - специальном ящике с подсветкой. Через просвечивающую скорлупу виден эмбрион, сосуды хорионалланто йеной оболочки, границы воздушного мешка. Жизнеспособный эмбрион подвижен, кровеносные сосуды оболочки заполнены кровью. На скорлупе яйца отмечают карандашом границы воздушного мешка и положение эмбриона.

Отобранные яйца тщательно дезинфицируют на тупом конце (или на боковой стороне яйца): скорлупу протирают спиртом; смазывают йодом: повторно обрабатывают спиртом и, как правило, обжигают,

Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 2664 | Нарушение авторских прав