 |
|
АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология |
Б) Перевиваемые культуры клеток (линии клеток)Это стабильные культуры клеток, которые способны бесконечно долго размножаться вне организма, если их культивировать в соответствующих условиях. Например, перевиваемые культуры из амниона человека (FL, А-8), почки обезьян (VERO - от зелёной мартышки, LLC-MK2 - от макаки-резус), эмбриона мыши (ЗТЗ), из опухолевых клеток человека (HeLa - из рака шейки матки, Нер-2 - из рака гортани) и многие другие. Более подробный перечень международных клеточных линий приведён на стр., табл. 3 В ряде стран существуют специальные центры, где хранятся банки клеточных линий. Например, американская коллекция насчитывает более 2,5 тыс. линий. В России такие банки международных клеточных линий созданы в нескольких вирусологических институтах (в Москве, Санкт-Петербурге и Екатеринбурге). Перевиваемые культуры клеток обладают целым рядом преимуществ по сравнению с первичными. Работа с перевиваемыми культурами менее трудоёмка: они, как правило, свободны от латентных вирусов; отличаются большим диапазоном чувствительности ко многим вирусам. Вирусологи различных стран могут пользоваться одними и теми же международными перевиваемыми клеточными линиями. Однако перевиваемые культуры не пригодны для производства вирусных вакцин, так как существуют опасения об их возможной злокачественности. Перевиваемые культуры клеток без пересева на свежую среду довольно быстро дегенерируют (быстрее, чем первичные культуры). При длительных пассажах их исходные свойства могут измениться. Для большей стабильности перевиваемых культур клеток рекомендуется пользоваться клональными культурами (выделенными из одной клетки), с которыми удаётся получить наиболее стандартные результаты опытов. Поддерживание перевиваемых культур клеток в лаборатории. Для этой цели исходную (маточную) культуру клеток выращивают в матрацах с питательной средой, еженедельно пересевая культуру в новые сосуды. Повседневные вирусологические исследования обычно проводят с культурами клеток в пробирках. При работе с пробирочными культурами также рекомендуется пересевать их через 7-8 дней, или же раз в 3-4 дня заменять питательную среду свежей, тогда клеточные культуры сохраняют свою жизнеспособность 2-3 недели. Чтобы осуществить пересев перевиваемой культуры, необходимо отделить клеточный слой от стенки пробирки и получить клетки во взвешенном состоянии. Иногда это отделение проводят механическим путём - с помощью соскабливания пастеровской пипеткой; можно воздействовать на клеточный пласт трипсином. Но чаще всего для этой цели применяют версен (раствор натриевой соли этилен-диамино-тетра-уксусной кислоты), который связывает двухвалентные катионы магния и кальция. Эти ионы способствуют сохранению целостности пласта и прикреплению его к стеклу, поэтому при их связывании клетки разъединяются и отделяются от стекла при лёгком встряхивании. Полученную клеточную взвесь центрифугируют при 1000 об/мин в течение 10-15 минут., надосадочная жидкость удаляется, а к осадку клеток добавляют свежую питательную среду. После подсчёта клеток в камере Горяева устанавливают концентрацию 100 000 клеток в 1 мл с помощью дальнейшего разведения питательной средой. Полученную взвесь клеток разливают по 1 мл в стерильные пробирки, которые закрывают резиновыми пробками и инкубируют в термостате в наклонном положении. Для культивирвоания перевиваемых культур клеток применяют среду 199 (часто с добавлением 10% бычьей сьювротки), среду Игла с добавлением 20% сыворотки, 0,5% гидролизах лактальбумина, содержащий 5% телячьей сыворотки.
Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 3156 | Нарушение авторских прав |