 |
|
АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология |
Клонирование ДНК
Метод клонирования позволяет получать фрагменты ДНК любого происхождения в неограниченном количестве. Для клонирования в прокариотических клетках используют плазмиды и фаги, в эукариотических клетках - дрожжевые плазмиды. Плазмиды представляют небольшие кольцевые молекулы двухцепочечной ДНК, которые часто несут жизненно важные для клетки гены, например гены устойчивости к антибиотикам. Присутствие таких генов-маркеров позволяет использовать плазмиды в геномных технологиях. На первом этапе клонирования плазмидную ДНК выделяют из клеток и используют в качестве вектора клонирования. С помощью рестрикционной эндонуклеазы плазмидную ДНК разрезают в одной точке и встраивают в нее фрагмент ДНК, который необходимо клонировать. Образующуюся при этом гибридную (рекомбинантную) ДНК вводят в бактериальную клетку-хозяина. Предварительно производят специальную обработку клеток-хозяев для того, чтобы на короткое время они стали проницаемы для макромолекул. Плазмиды проникают только в некоторые из обработанных клеток. На следующем этапе эти клетки легко выделяют в селективной среде, так как только они могут расти в присутствии антибиотиков, поскольку вместе с плазмидой получили соответствующий ген устойчивости. Далее клетки, содержащие рекомбинантную ДНК, размножают (собственно клонирование). При их делении плазмиды также реплицируются, образуя огромное количество копий исходного фрагмента ДНК. В конце периода пролиферации из клеток выделяют гибридные молекулы плазмидной ДНК и, обрабатывая их повторно той же рестриктирующей эндонуклеазой, вырезают копии исходных фрагментов ДНК. При необходимости индуцируют экспрессию клонированного фрагмента ДНК (гена) и получают кодируемый им белок. Коллекция клонов ДНК, содержащая хотя бы по одному экземпляру каждого из фрагментов ДНК, входящих в состав генома данного вида, называется геномной библиотекой.
Рис. 5. Схема клонирования Вопросы для самоподготовки 1. Цели и возможности генеалогического метода. Чем характеризуются родословные при различных типах наследования? 2. Что такое кариотип? Как изучают кариотип человека? 3. Назовите известные классификации хромосом. Что позволяет определить дифференциальное окрашивание хромосом по сравнению с рутинной окраской? 4. Что такое половой хроматин? 5. Назовите хромосомные болезни, обусловленные изменением числа аутосом, половых хромосом, структуры хромосом. 6. В чем суть близнецового метода? Как определить конкордантность в парах близнецов? 7. Приведите формулу для вычисления коэффициента наследуемости, показывающего влияние среды и генотипа в развитии признака. 8. Назовите возможности биохимического метода в генетических исследованиях. 9. Приведите закон Харди-Вайнберга. Что характеризует идеальную и реальную популяцию? 10. Перечислите системы браков в человеческих популяциях. Какие возможны последствия близкородственных браков? 11. Что такое рестрикция ДНК? Охарактеризуйте действие рестрикта. 12. В чем суть полимеразной цепной реакции? 13. Какие методы молекулярной генетики лежат в основе ДНКдиагностики? 14. Что такое рекомбинация ДНК? Как производят клонирование ДНК? 15. Задачи медико-генетического консультирования.
Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 1208 | Нарушение авторских прав |
