АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология
|
ХАРАКТЕРИСТИКА ВИРУСА
Морфология и химический состав. Возбудитель содержит 2-нитевую неинфекционную РНК, состоящую из 10 сегментов с мол.м. от 0,28*106 до 2,7-106 Д. РНК нечувствительна к РНК-азе. Вирус содержит 80% белка и 20% РНК. Капсид гексагональной формы, однослойный, состоит из 32 капсомеров, расположенных в симметрии 5:3:2. Два полиипептида в виде диффузного белкового слоя, окружают капсид. Наружный (экстракапсидный) слой маскирует капсомеры и увеличивает диаметр вириона по сравнению с нуклеокапсидной формой. Он, вероятно, "маскирует" и вирусную транскриптазу, которая может быть обнаружена после его удаления. Диаметр полных частиц 65-77 им (вмес.те с экстракапсидным слоем). Диаметр нуклеокапсидов 61-67 нм.
Обнаружены вирусные частицы 2-х типов: легкие и тяжелые. Первые частицы обладают большей инфекционностью, плавучая плотность их в CsCL 1,36 г/см3, коэффициент седиментации 550 S, диаметр 69,2 нм. Они содержали 4 основных (мол.м. 110000, 11000, 58000 и 32000 Д) и 3 минорных капсидных белка (мол.м 155000, 72000 и 38000 Д). Тяжелые частицы так же инфекционны, плавучая плотность их в хлористом цезии 1,38 г/см3, коэффициент седиментации 470 S, диаметр 63,2 нм. На поверхности четко различимы 32 капсомера. Тяжелые частицы обладают РНК-зависимой РНК-полимеразной активностью, которая в присутствии Mg2+ увеличивается и становится максимальной при 28°С. Полагают, что in vitro и in vivo вирусный геном транскрибируется при помощи энзима, присутствующего в капсиде. Легкие частицы - это зрелые вирионы, а тяжелые - их предшественники или продукты деградации под действием лизосомальных ферментов.
Различают вирионы без оболочки и с оболочкой. Первые не имеют наружного слоя полых капсомеров, но покрыты слоем тонких поверхностных выступов. Вторые обнаружены на поздних стадиях инфекции. Оболочка приобретается, очевидно, в процессе выхода вируса из клетки и включения клеточной мембраны. Частицы без оболочки, но заключенные в мембранный мешок, и частицы с оболочкой защищены от нейтрализующего действия специфических AT. Этим объясняется факт одновременной циркуляции в крови вируса и AT. Расщепление наружного капсидного белка VP2 вируса сопровождается образованием 1-капсидных частиц с высокой инфекционностью и утратой ГА-активности. Они формируют наружный капсид вириона; а полипептиды VP1, VP3 и VP4 находятся в поверхностном слое нуклеокапсида. Главными капсидными (наружными) белками данного вируса являются белки VP2 иУР5. Капсидные протеины - основные для различных серотипов вируса КЛО и перспективны для создания рекомбинантной вакцины. Длина РНК 10-го сегмента у всех 6-ти изолятов составляет 822 нуклеотида. Степень гомологии нуклеотидных последовательностей у разных изолятов РНК 10 сегмента генома составляла от 82 до 99%. Все гены данного вируса, детерминирующие неструктурные белки (NSI, NS2, NS3), а также большинство полипептидов внутреннего капсида (VP1, VP3, VP4) являются консервативными, другие же два гена, детермирующие 2 компонента внутреннего капсида (VP6 и VP7) менее консервативны. Возможен эффективный обмен 5-ю сегментами (из 10 сегментов 2-нитевидной РНК 10 и 11-го серотипов).
Устойчивость. Вирус КЛО устойчив к эфиру, хлороформу, дезоксихолату натрия. Резистентность к дезоксихолату обусловлена присутствием чужеродных белков, так как очищенный вирус чувствителен к этому веществу, но инактивируется медленнее, чем арбовирусы. Чувствителен к трипсину, кислому рН. При рН ниже 6,0 вирус инактивируется в условиях 37°С в течение 1 мин. Он стабилен при рН 6,5-8,0, достаточно устойчив в щелочной зоне; очень стабилен в р-ре с рН 9,0 и с низкой концентрацией солей. В баранине и говядине при созревании, когда рН находится между рН 5,6 и 6,3, вирус инактивируется. В тушах овец при 4°С, если рН мяса не снижается ниже 6,3, вирус сохраняется до 30 дн. Наличие 2-компонентной кривой термоинактивации вируса при 37°, 46° и 56° указывает на гетерогенность вирусной популяции. Инактивация протеина происходит при 46-56°С, а РНК - при более низкой температуре (37-46° С). Вирус сохраняется в загнивающей крови. Для вирус-исследований кровь помещают в жидкость Эдингтона (5 г щавелевокислого калия, 5 г фенола, 500 мл дистиллированной воды), в которой вирус сохраняет активность при комнатной температуре в течение нескольких лет. В лиофильно высушенном со стабилизаторами вируссодержащем материале он сохраняется несколько лет как при 20°, так и при 4°С. При медленном замораживании до -10° или -20°С вирус разрушается, но выживает при более низких температурах. Нагревание при 60°С инактивирует его за 5 мин; 3%-ный р-р формалина - за 48-72 ч, хинозол в соотношении 1:2000 - за 30 мин., 3% р-р едкого натра и 70% спирт - за 5 мин.
Антигенная структура. Вирус КЛО имеет 2 группоспецифических неинфекционных растворимых AГ - КС и преципитирующий. Первый представлен частицами диаметром 8 нм и входит в состав вириона, а второй может быть компонентом самой вирусной частицы или продуктом размножения вируса в инфицированных клетках. Размножение вируса связано с синтезом растворимого АГ как предшественника.
Антигенная активность. У переболевших животных образуются ВН, КС и ПА. Первые появляются на 14 день после заражения животного. К 30 дню их содержание достигает максимума и удерживается до 12 мес.. Присутствие у реконвалесцентов ВНА к вирусу одного типа не защищает его от заражения вирусами других типов. КСА у зараженных овец обнаруживаются на 10-й день после первого подъема температуры, достигая пика на З6-й день, и сохраняются в течение 6-8 нед. Через 12 мес.. они выявляются в едва уловимых титрах. Для определения чувствительности животного к вирусу наиболее приемлема РДП. У переболевших овец ВНА достигают максимального титра к 30-му дню и сохраняются не менее года в течение нескольких мес.яцев после начала заболевания. Белок VP2 вызывает у овец образование ВНА и ПА, а также и устойчивость к заражению вирулентным штаммом. Прививка полипептидом VP7 не приводила к образованию ВНА и иммунитета. Биохимическая характеристика AT не изучена. ВНА и ПА стабильны при 56°С, КСА при этой температуре быстро разрушаются. У каждого животного титры ВНА, КСА различны. Сыворотки крови овец обладают антикомплементарностью, а сыворотки коров содержат неспецифические ингибиторы.
Антигенная вариабельность и родство. В настоящее время различают 24 серотипа вируса КЛО, АГ классификацию которых, проводят при помощи перекрестной РН. Происхождение большого числа АГ вариантов не выяснено. Хайг (1959 г.) высказал предположение об АГ дрейфе этого вируса под влиянием остаточного иммунитета в популяции животных. Для каждой АГ группы определен штамм-прототип. Вирус каждого серотипа создает прочный и длительный иммунитет только против гомологичного типа и незначительный против гетерологичного. Это свидетельствует о существовании общегруппового (для всех штаммов) АГ компонента. Степень выраженности иммунитета против гетерологичных типов различна. В РСК установлено родство вируса с возбудителем эпизоотической геморрагической болезни оленей (ЭГБО). Показано, что контаминация вирусом КЛО живых вакцин против чумы и парвовируса собак является причиной абортов и гибели беременных сук. Полипептид VP2 определяет серотиповую, a VP7 - групповую специфичность вируса. С этими полипептидами связана индукция ВНА и КСА. Гемагглютинирующие свойства не установлены.
Локализация вируса, вирусемия, вирусоносительство. Вирус содержится в крови, сыворотке, плазме и кроветворных органах больных животных. С повышением температуры со 2-3-го дня по 9-10-й дн после заражения его обнаруживают в крови, где он ассоциируется с лейкоцитами. Так как вирус проходит плацентарный барьер, его можно выделить также из крови плода овец и коров. Он не связан с эритроцитами и может присутствовать в сыворотке одновременно с AT. Сведения о длительности вирусемии у животных-реконвалесцентов противоречивы. Вирус обнаруживали в крови зараженных коров в течение 28 дн., а в крови овец - 35-49 дн. Имеются данные о длительных перерывах виремии. В крови отдельных овец его удавалось обнаружить в течение 3-4 мес., а в крови КРС - в течение года. Селезенка и мезентериальные лимфоузлы наиболее подходящие органы для посмертного выделения вируса. КРС, не проявляя видимых симптомов болезни, может резервировать вирус в межэпизоотический период (до 700 дн. после заражения), оставаясь длительное время вирусоносителем при наличии ВНА или без них. В экспериментальных условиях у КРС виремия развивается начиная со 2-го по 50-й день после заражения, пик виремии отмечен на 7-й день. Часто естественная и экспериментальная инфекция у КРС протекает без клинических признаков, но при этом всегда отмечается более продолжительная (иногда до 120-150 дн), чем у овец, виремия. В эпизоотических районах протекает субклинически и трудно диагностируется.
Экспериментальная инфекция. Овец можно заразить при введении материала интраназально, внутривенно, внутрибрюшинно, подкожно, внутрикожно, внутримышечно, интрацеребрально и per os. Чтобы вызвать болезнь, достаточно ввести в вену 0,01 мл вирулентной крови. В экспериментальных условиях удавалось заражать горных газелей (Gazella gazella) в возрасте 4-12 мес.. Клинически болезнь не проявлялась, однако развивалась виремия, продолжавшаяся до 35 дн. Высокий уровень ВНА у них отмечен на протяжении 5 мес.. наблюдения. Контактным путем вирус не передается. При интрацеребральной инокуляции возбудителя удается вызвать летальную инфекцию новорожденных мышат и хомячков. Однокопытные, собаки, кошки, хорьки и морские свинки к данному вирусу нечувствительны.
Культивирование. Вирус культивируют в КЭ 6-8-дн возраста, в организме новорожденных мышей и в различных культурах клеток. КЭ заражают в желточный мешок, на ХАО или внутривенно. В последнем случае используют КЭ 11-13 дн возраста. После заражения их инкубируют при 33,6°С. Погибают они через 3-6 дн. За 6-8 ч до гибели вирус достигает наибольшего титра (105,8-108 ЭЛД50/г). КЭ имеют характерный вишнево-красный цвет. Мышечная ткань, печень и мозг в состоянии дегенеративного изменения. Последовательное пассирование вируса в КЭ приводит к его аттенуации, что легло в основу получения живой вакцины (метод Александера). Полевые штаммы эпизоотического вируса блутанга выделяют с большим успехом на эмбрионах, чем на культуре клеток. При интрацеребральном заражении вирус размножается в мозге новорожденных мышей и вызывает симптомы энцефалита и гибель через 3-5 дн. Наиболее восприимчивы мыши 1-3-дн возраста. У взрослых мышей вирус размножается, но инфекция протекает инаппарантно. К вирусу чувствительны культуры клеток почки ягнят, эмбрионов КРС и молодых хомяков. Вирус, адаптированный к первичной культуре клеток почек ягнят, удается культивировать в клетках HeLa, МВ-2 и ВНК-21. Первые изменения в зараженных клетках ВНК-21 появляются через 18 ч, а полная их деструкция наступает через 59 ч после инокуляции вируса. Изменения характеризуются округлением клеток, редукцией содержимого цитоплазмы и появлением отдельных структур, напоминающих синцитий. Наиболее чувствительна перевиваемая культура клеток VERO. Культуру клеток почек ягнят и эмбрионов КРС в настоящее время широко используют при изготовлении вакцины против КЛО для размножения аттенуированных штаммов вируса. Появление и развитие ЦПИ сопровождается возрастанием инфекционности титра вируса.
Особенности внутриклеточной репродукции. Вирус развивается в цитоплазме зараженных клеток, в цитоплазматическом гранулярном матриксе и образует субструктурные филаменты и трубочки. В культуре клеток он формирует включения 2-х типов: внутриплазматические (РНК-положительные) и внутриядерные (ДНК-положительные). Все шт вируса КЛО образуют бляшки. Вирус в инфицированной культуре клеток формирует внутркл., включения, которые выявляются через 12-16 ч после заражения.
Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 765 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 |
|