АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

ХАРАКТЕРИСТИКА ВИРУСА

Морфология и химический состав. Возбудитель содержит 2-нитевую неинфекцион­ную РНК, состоящую из 10 сегментов с мол.м. от 0,28*10⁶ до 2,7-10⁶ Д. РНК нечувствительна к РНК-азе. Вирус содержит 80% белка и 20% РНК. Капсид гексагональной формы, однослойный, состоит из 32 капсомеров, расположенных в симметрии 5:3:2. Два полиипептида в виде диффузного белкового слоя, окружают капсид. Наружный (экстракапсидный) слой маскирует капсомеры и увеличивает диаметр вириона по сравнению с нуклеокапсидной формой. Он, вероятно, "маскирует" и вирусную транскриптазу, которая может быть обна­ружена после его удаления. Диаметр полных частиц 65-77 им (вмес.те с экстракапсидным слоем). Диаметр нуклеокапсидов 61-67 нм.

Обнаружены вирусные частицы 2-х типов: легкие и тяжелые. Первые частицы обладают большей инфекционностью, плавучая плотность их в CsCL 1,36 г/см³, коэффициент седи­ментации 550 S, диаметр 69,2 нм. Они содержали 4 основных (мол.м. 110000, 11000, 58000 и 32000 Д) и 3 минорных капсидных белка (мол.м 155000, 72000 и 38000 Д). Тяжелые частицы так же инфекционны, плавучая плотность их в хлористом цезии 1,38 г/см³, коэффициент седиментации 470 S, диаметр 63,2 нм. На поверхности четко различимы 32 капсомера. Тяжелые частицы обладают РНК-зависимой РНК-полимеразной ак­тивностью, которая в присутствии Mg²⁺ увеличивается и становится максимальной при 28°С. Полагают, что in vitro и in vivo вирусный геном транскрибируется при помощи энзи­ма, присутствующего в капсиде. Легкие частицы - это зрелые вирионы, а тяжелые - их предшественники или продукты деградации под действием лизосомальных ферментов.

Различают вирионы без оболочки и с оболочкой. Первые не имеют наружного слоя по­лых капсомеров, но покрыты слоем тонких поверхностных выступов. Вторые обнаружены на поздних стадиях инфекции. Оболочка приобретается, очевидно, в процессе выхода виру­са из клетки и включения клеточной мембраны. Частицы без оболочки, но заключенные в мембранный мешок, и частицы с оболочкой защищены от нейтрализующего действия спе­цифических AT. Этим объясняется факт одновременной циркуляции в крови вируса и AT. Расщепление наружного капсидного белка VP2 вируса сопровождается образованием 1-капсидных частиц с высокой инфекционностью и утратой ГА-активности. Они форми­руют наружный капсид вириона; а полипептиды VP1, VP3 и VP4 находятся в поверхност­ном слое нуклеокапсида. Главными капсидными (наружными) белками данного вируса являются белки VP2 иУР5. Капсидные протеины - основные для различных серотипов ви­руса КЛО и перспективны для создания рекомбинантной вакцины. Длина РНК 10-го сегмента у всех 6-ти изолятов составляет 822 нуклеотида. Степень гомологии нуклеотидных последовательно­стей у разных изолятов РНК 10 сегмента генома составляла от 82 до 99%. Все гены данного вируса, детерминирующие неструктурные белки (NSI, NS2, NS3), а также большин­ство полипептидов внутреннего капсида (VP1, VP3, VP4) являются консервативными, дру­гие же два гена, детермирующие 2 компонента внутреннего капсида (VP6 и VP7) менее кон­сервативны. Возможен эффективный обмен 5-ю сегментами (из 10 сег­ментов 2-нитевидной РНК 10 и 11-го серотипов).

Устойчивость. Вирус КЛО устойчив к эфиру, хлороформу, дезоксихолату натрия. Резистентность к дезоксихолату обусловлена присутствием чужеродных белков, так как очи­щенный вирус чувствителен к этому веществу, но инактивируется медленнее, чем арбовирусы. Чувствителен к трипсину, кислому рН. При рН ниже 6,0 вирус инактивируется в услови­ях 37°С в течение 1 мин. Он стабилен при рН 6,5-8,0, достаточно устойчив в щелочной зоне; очень стабилен в р-ре с рН 9,0 и с низкой концентрацией солей. В баранине и говядине при созревании, когда рН находится между рН 5,6 и 6,3, вирус инактивируется. В тушах овец при 4°С, если рН мяса не снижается ниже 6,3, вирус сохраняется до 30 дн. Наличие 2-компонентной кривой термоинактивации вируса при 37°, 46° и 56° указывает на гетероген­ность вирусной популяции. Инактивация протеина происходит при 46-56°С, а РНК - при бо­лее низкой температуре (37-46° С). Вирус сохраняется в загнивающей крови. Для вирус-исследований кровь помещают в жидкость Эдингтона (5 г щавелевокислого калия, 5 г фенола, 500 мл дис­тиллированной воды), в которой вирус сохраняет активность при комнатной температуре в течение нескольких лет. В лиофильно высушенном со стабилизаторами вируссодержащем материале он сохраняется несколько лет как при 20°, так и при 4°С. При медленном замо­раживании до -10° или -20°С вирус разрушается, но выживает при более низких температу­рах. Нагревание при 60°С инактивирует его за 5 мин; 3%-ный р-р формалина - за 48-72 ч, хинозол в соотношении 1:2000 - за 30 мин., 3% р-р едкого натра и 70% спирт - за 5 мин.

Антигенная структура. Вирус КЛО имеет 2 группоспецифических неинфекционных растворимых AГ - КС и преципитирующий. Первый представлен частицами диаметром 8 нм и входит в состав вириона, а второй может быть компонентом самой вирусной частицы или продуктом размножения вируса в инфицированных клетках. Размножение вируса свя­зано с синтезом растворимого АГ как предшественника.

Антигенная активность. У переболевших животных образуются ВН, КС и ПА. Пер­вые появляются на 14 день после заражения животного. К 30 дню их содержание достигает максимума и удерживается до 12 мес.. Присутствие у реконвалесцентов ВНА к вирусу одно­го типа не защищает его от заражения вирусами других типов. КСА у зараженных овец об­наруживаются на 10-й день после первого подъема температуры, достигая пика на З6-й день, и сохраняются в течение 6-8 нед. Через 12 мес.. они выявляются в едва уловимых тит­рах. Для определения чувствительности животного к вирусу наиболее приемлема РДП. У переболевших овец ВНА достигают максимального титра к 30-му дню и сохраняются не менее года в течение нескольких мес.яцев после начала заболевания. Белок VP2 вызывает у овец образование ВНА и ПА, а также и устойчивость к заражению вирулентным штаммом. Прививка полипептидом VP7 не приводила к образованию ВНА и иммунитета. Биохимическая характеристика AT не изучена. ВНА и ПА стабильны при 56°С, КСА при этой температуре быстро разрушаются. У каждого животного титры ВНА, КСА различ­ны. Сыворотки крови овец обладают антикомплементарностью, а сыворотки коров содержат неспецифические ингибиторы.

Антигенная вариабельность и родство. В настоящее время различают 24 серотипа вируса КЛО, АГ классификацию которых, проводят при помощи перекрестной РН. Проис­хождение большого числа АГ вариантов не выяснено. Хайг (1959 г.) высказал предположе­ние об АГ дрейфе этого вируса под влиянием остаточного иммунитета в популяции живот­ных. Для каждой АГ группы определен штамм-прототип. Вирус каждого серотипа создает прочный и длительный иммунитет только против гомологичного типа и незначительный против гетерологичного. Это свидетельствует о существовании общегруппового (для всех штаммов) АГ компонента. Степень выраженности иммунитета против гетерологичных ти­пов различна. В РСК установлено родство вируса с возбудителем эпизоотической геморра­гической болезни оленей (ЭГБО). Показано, что контаминация вирусом КЛО живых вакцин против чумы и парвовируса собак является причиной абортов и гибели беременных сук. Полипептид VP2 определяет серотиповую, a VP7 - групповую специфичность ви­руса. С этими полипептидами связана индукция ВНА и КСА. Гемагглютинирующие свойства не установлены.

Локализация вируса, вирусемия, вирусоносительство. Вирус содержится в крови, сыворотке, плазме и кроветворных органах больных животных. С повышением температу­ры со 2-3-го дня по 9-10-й дн после заражения его обнаруживают в крови, где он ассоцииру­ется с лейкоцитами. Так как вирус проходит плацентарный барьер, его можно выделить также из крови плода овец и коров. Он не связан с эритроцитами и может присутствовать в сыворотке од­новременно с AT. Сведения о длительности вирусемии у животных-реконвалесцентов про­тиворечивы. Вирус обнаруживали в крови зараженных коров в течение 28 дн., а в крови овец - 35-49 дн. Имеются данные о длительных перерывах виремии. В крови отдельных овец его удавалось обнаружить в течение 3-4 мес., а в крови КРС - в течение года. Селезенка и мезентериальные лимфоузлы наиболее подходящие органы для посмертного выделения вируса. КРС, не проявляя видимых симптомов болезни, может резервировать вирус в межэпизооти­ческий период (до 700 дн. после заражения), оставаясь длительное время вирусоносителем при наличии ВНА или без них. В экспериментальных условиях у КРС виремия развивается начиная со 2-го по 50-й день после заражения, пик виремии отмечен на 7-й день. Часто ес­тественная и экспериментальная инфекция у КРС протекает без клинических признаков, но при этом всегда отмечается более продолжительная (иногда до 120-150 дн), чем у овец, ви­ремия. В эпизоотических районах протекает субклинически и трудно диагностируется.

Экспериментальная инфекция. Овец можно заразить при введении материала интраназально, внутривенно, внутрибрюшинно, подкожно, внутрикожно, внутримышечно, интрацеребрально и per os. Чтобы вызвать болезнь, достаточно ввести в вену 0,01 мл виру­лентной крови. В экспериментальных условиях удавалось заражать горных газелей (Gazella gazella) в возрасте 4-12 мес.. Клинически болезнь не проявлялась, однако развивалась вире­мия, продолжавшаяся до 35 дн. Высокий уровень ВНА у них отмечен на протяжении 5 мес.. наблюдения. Контактным путем вирус не передается. При интрацеребральной инокуляции возбудителя удается вызвать летальную инфекцию новорожденных мышат и хомячков. Од­нокопытные, собаки, кошки, хорьки и морские свинки к данному вирусу нечувствительны.

Культивирование. Вирус культивируют в КЭ 6-8-дн возраста, в организме новорож­денных мышей и в различных культурах клеток. КЭ заражают в желточный мешок, на ХАО или внутривенно. В последнем случае используют КЭ 11-13 дн возраста. После заражения их инкубируют при 33,6°С. Погибают они через 3-6 дн. За 6-8 ч до гибели вирус достигает наибольшего титра (10^5,8-10⁸ ЭЛД_50/г). КЭ имеют характерный вишнево-красный цвет. Мы­шечная ткань, печень и мозг в состоянии дегенеративного изменения. Последовательное пассирование вируса в КЭ приводит к его аттенуации, что легло в основу получения живой вакцины (метод Александера). Полевые штаммы эпизоотического вируса блутанга выделя­ют с большим успехом на эмбрионах, чем на культуре клеток. При интрацеребральном за­ражении вирус размножается в мозге новорожденных мышей и вызывает симптомы энце­фалита и гибель через 3-5 дн. Наиболее восприимчивы мыши 1-3-дн возраста. У взрослых мышей вирус размножается, но инфекция протекает инаппарантно. К вирусу чувствительны культуры клеток почки ягнят, эмбрионов КРС и молодых хомя­ков. Вирус, адаптированный к первичной культуре клеток почек ягнят, удается культивиро­вать в клетках HeLa, МВ-2 и ВНК-21. Первые изменения в зараженных клетках ВНК-21 по­являются через 18 ч, а полная их деструкция наступает через 59 ч после инокуляции вируса. Изменения характеризуются округлением клеток, редукцией содержимого цитоплазмы и по­явлением отдельных структур, напоминающих синцитий. Наиболее чувствительна переви­ваемая культура клеток VERO. Культуру клеток почек ягнят и эмбрионов КРС в настоящее время широко используют при изготовлении вакцины против КЛО для размножения аттенуированных штаммов вируса. Появление и развитие ЦПИ сопровождается возрастанием инфекционности титра вируса.

Особенности внутриклеточной репродукции. Вирус развивается в цитоплазме зара­женных клеток, в цитоплазматическом гранулярном матриксе и образует субструктурные филаменты и трубочки. В культуре клеток он формирует включения 2-х типов: внутриплазматические (РНК-положительные) и внутриядерные (ДНК-положительные). Все шт вируса КЛО образуют бляшки. Вирус в инфицированной культуре клеток формирует внутркл., включения, которые выявляются через 12-16 ч после заражения.

Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 772 | Нарушение авторских прав