АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Серодиагностика заболевания затруднительна, так как при хроническом течении инфек­ции AT обнаруживаются непостоянно и бывают в невысоких титрах

Серодиагностика заболевания затруднительна, так как при хроническом течении инфек­ции AT обнаруживаются непостоянно и бывают в невысоких титрах. Диагноз на про­шедшую инфекцию, а также латентное вирусоносительство обычно ставят при помощи РН в культуре клеток, определяя титры AT в сыворотках реконвалесцентов. Для этого лучше ис­следовать парные сыворотки, взятые с интервалом 3-4 нед. При диагностике скрытого тече­ния инфекции чаще используют сыворотки крови убойного скота, поступающего с клиникой не диагностированной инфекции кишечного и респираторного трактов. Обычно в таких слу­чаях процент положительных сывороток (титры от 1:16 до 1: 128) варьирует в широких пре­делах и может достигать 30-50 (иногда до 80) У клинически здоровых животных процент положительных проб может колебаться от 6-8 до 20-30. Динамика появления и угасания титров ВНА недостаточно изучена. Перед исследованием сыворотки прогревают в водяной бане при температуре 57-58°С 30 мин.

В США разработан быстрый количественный метод титрования ВД КРС. Он состоит в микротитровании с использованием цитопатогенных и не цитопатогенных изолятов вируса и перевиваемой линии клеток бычьей почки - МДВК. Для этого серийные разведения вируссодержащей жидкости и суспензию клеток в концентрации 1-Ю⁵ в среде с 2% сыворотки крови лошади заливают в лунки пластин Terasaki и проводят микротитрование в НИФ, ко­торую учитывают на дне лунок пластин, используя водно-иммерсионный объектив микро­скопа. Вирус также титруют и по бляшкообразованию. Специфическую флюоресценцию в клетках наблюдали уже через 12 ч после заражения, окончательные результаты считали че­рез 72 ч инкубирования. Результаты титрования вируса по бляшкам и в микротитровании совпадали. Микротитрование вируса по ИФ имеет преимущества над стандартным методом титрования по бляшкам, меньше времени и материалов и особенно незаменимо при титровании не цитопатогенных изолятов ВД.

РН. Её ставят методом разведения испытуемых сывороток с постоянной дозой стан­дартного вируса в культуре клеток ПЭК или ТБ. Положительными считают сыворотки с титром AT 1:16 и выше, в парных сыворотках - повышение титра AT во второй пробе в 4 раза и более. При экспериментальном заражении у всех телят через 15-61 день обнаружива­ли ВНА в титре 1:64 - 1.1024 Реакция, суть которой заключается в подавлении образования бляшек AT исследуемой сыворотки, оказалась пригодной для серологических исследований при ВД-БС. После получения гомогенного слоя клеток культуру промывают 1 раз фосфат­ным буферным р-ром и заражают 15 мл суспензии вируса в таком разведении, чтобы в 1 мл ее содержалось около 20 БОЕ. После адсорбции вируса при 37°С в течение 30 мин суспен­зию отсасывают и наносят на культуру 15 мл агара После застывания агара на его поверх­ности раскладывают кружки фильтровальной бумаги, насыщенной неразведенной иссле­дуемой сывороткой. После 4 дн инкубации при 37°С учитывают результаты. Доказательст­вом того, что исследуемая сыворотка содержит AT, служит отсутствие повреждения слоя клеток вокруг насыщенного ею кружка фильтровальной бумаги, что обнаруживается в виде венка клеток.

РСК. Ставят микрометодом с использованием микротитратора Такачи или Титертека При их отсутствии возможна постановка РСК в пробирках в общем объеме 0,5 мл.

РДП. Не нашла широкого применения в ветеринарной диагностической практике при обнаружении AT в сыворотках животных. ПА появляются в сравнительно поздние сроки (3-4 нед) после инфицирования и могут сохраняться 4 мес (титры AT до 1.16).

ELISA. В 500 раз чувствительнее РН, менее трудоемок и быстрее выполним. В качестве АГ использовали вирус, концентрированный ПЭГ и очищенный градиентным равновесным ультрацентрифугированием.

Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 639 | Нарушение авторских прав