АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Серологическая идентификация. ИФ. Аналогична таковой при диагностике аденовирусной инфекции

ИФ. Аналогична таковой при диагностике аденовирусной инфекции. Этим методом АГ ВД обнаруживают в клетках слизистой оболочки прямой кишки, селезенки, легких и лимфоузлов экспериментально зараженных животных. Изучено распределение АГ ВД-БС в тканях животных остром и хроническом течениях болезни. В лимфоидных тканях АГ рас полагается в клетках системы фагоцитирующих мононуклеаров. Между первоначальным обнаружением АГ в слизистой кишечника, кератинизированном эпителии верхних отделов пищеварительной системы и кожи и прогрессированием патологических признаков имеется скрытый период. ИФ биопсийного материала слизистых оболочек ротовой и носовой полостей пригодна для ранней прижизненной диагностики вируса диареи. ИФ для обнаружения АГ вируса в клетках из носоглоточных смывов - надежный и быстрый способ выявления животных, пер-систентно инфицированных вирусом. При исследовании препаратов обращают внимание на свечение АГ в цитоплазме не разрушенных клеток. Яркая зеленая флюоресценция в виде гранул или диффузного свечения цитоплазмы не менее чем в 10% клеток позволяет оценить препарат как положительный. Предварительный диагноз ставят при наличии не менее 30% положительных препаратов от общего количества исследованных проб. Удобным оказался непрямой метод ИФ с использованием конъюгированных Fab-фрагментов AT из гиперим­мунной свиной сыворотки против ВД-БС КРС Специфическая флюоресценция вирусного АГ в культуре бычьих макрофагов обнаруживалась в цитоплазме клеток Для идентифика­ции не цитопатогенных изолятов метод ИФ практически единственный. При наличии ЦПД в культурах клеток, зараженных изолятом, и положительной флюоресценции проводят окон­чательное типирование вируса в РН.

РН. Это основной метод идентификации вируса. Новые изоляты возбудителя ВБ-БС, не обладающие цитопатогенной активностью, могут быть идентифицированы при помощи ги­периммунной сыворотки к вирусу диареи по подавлению феномена экзальтации вируса НБ, который используют для индикации подобных штаммов.

РДП. Обеспечивает быструю и точную постановку диагноза, однако пока чувствитель­ность метода невелика, и его следует использовать в комплексе с другими методами лабора­торной диагностики и идентификации возбуди теля Приготовление испытуемого АГ и ме­тодика постановки РДП описаны ранее. Антисыворотку для РДП готовят на КРС Для иммунизации животных используют цитрированную кровь, взятую асептически от экс­периментально зараженных животных в период подъема температуры. Кровь вводят внут­ривенно (некоторым животным делают несколько таких инъекций). Кровь берут через 60-90 дн после инокуляции.

Выявление вируса ПЦР. Данный метод рекомендован для быстрой диагностики ВД-БС. После цикла обратной транскрипции образцы ткани инфицированной культуры клеток подвергают амплификации с использованием праймеров, обеспечивающих репликацию оп­ределенного сегмента гена белка gp48 ВД. Для обнаружения амплифицированных последо­вательностей используют электрофорез в ПААГ и гибридизацию с биотинилированным ДНК-зондом на последовательности г енома вируса лейкоза. При идентификации молочных стад, инфицированных вирусом ВД-БС КРС, также предложен метод ПЦР для работы с пробами молока.

ИФА. ИФА позволяет легко идентифицировать культуры клеток, инфицированные ВД. Идентификация с помощью монАТ в практическом диагностическом применении не разра­ботана. Однако получено 5 монАТ против вируса ВД-БС КРС с ВН-активностью, которые позволили разделить изоляты ВД на 4 группы По­лучена и изучена панель монАТ против Singer-изолята, с помощью которой были обнару­жены полипептиды мол м 56-58 кД и доказано, что гликопротеин, локализуется на поверх­ности вирионов и является носителем нейтрализующих эпитопов. Анализ с панелью монАТ показал АГ гетерогенность среди изолятов этого вируса.

Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 700 | Нарушение авторских прав