Стерилизация паром под давлением
(автоклавирование)~ самый эффективный метод стерилизации (температура выше 100 X). Осуществляют его в специальном аппарате—автоклаве. Принцип стерилизации основан на том, что чистый насыщенный водяной пар при высоком давлении, конденсируясь, повышает температуру внутри котла (автоклава). Уменьшение объема пара после конденсации способствует проникновению его во внутрь стерилизуемого предмета.'
Вертикальный автоклав (рис. 29, А) представляет собой цилиндрической формы двустенный металлический котел, сверху закрываемый герметично крышкой. Через специальный кран с воронкой между стенками заливают воду до определенного уровня. Внутренняя стенка котла в верхней части имеет отверстия, в нижней части котла — кран, через который при нагревании воды пар вытесняет воздух из котла автоклава. Сверху на автоклав надевают металлический защитный каркас, причем между ним и самим автоклавом должно быть свободное пространство. Автоклав нагревают электричеством. После загрузки автоклава крышку и кран, через который наливают воду, закрывают, нижний кран временно остается открытым. Нагреваемая вода между стенками автоклава кипит, образующийся пар поднимается вверх
Рис. 28. Электрическая водяная баня:
I — корпус; 2 — термометр-регулятор; 3 — крышка; 4— панель управления
и через верхние отверстия внутренней стенки проходит во внутрь котла, толчками вытесняя воздух через нижний открытый кран. Когда воздух весь вытеснится и пар начнет выходить ровной струей, нижний кран закрывают. В результате давление пара внутри автоклава повышается. Началом стерилизации считают момент достижения показания манометра заданной величины. Нагрев регулируют на протяжении всей стерилизации, поддерживая давление на одном уровне. При чрезмерном давлении в автоклаве предусмотрен предохранительный клапан, через который избыток пара выходит наружу. Современные автоклавы снабжены автоматическим устройством, регулирующим режим работы. При повышении давления пара соответственно повышается и температура в автоклаве; так, при давлении 50,6 кПа температура будет 110...И2Х, При 101,ЗкПа — 120...I21, при 151,9кПа-124...126, при 202,6 кПа - 132...133 X.
Манометры регистрируют давление пара без учета окружающего атмосферного давления {760 мм рт. ст.). По истечении времени стерилизации автоклав отключают. После охлаждения при нулевом показании манометра открывают ан для спуска пара. Крышку автоклава подают осторожно на себя, не заглядывая в котел, оберегая лицо от возможного воздействия остаточного пара. До полного выхода пара открывать крышку автоклава нельзя, так как при быстром падении давления внутри автоклава стерилизуемые жидкие среды закипают, пробки из пробирок выталкиваются вместе с жидкостью.
В автоклаве стерилизуют питательные среды, выдерживающие нагревание выше 100 °С, стеклянную посуду, завернутую в бумагу, перевязочный материал, халаты, помещенные в металлические биксы. Кроме того, обеззараживают использованные бактериальные культуры, посуду. В этих случаях давление пара и экспозиция стерилизации продолжительнее (151,9кПа— 1 ч), чем при стерилизации чистого материала (50,6..Л01,ЗкПа — 30...40 мин).
Для проверки качества работы автоклава, соответствия показаний манометра и температуры пара используют различные вещества (бензонафтол, антипирин, сера), имеющие определенную точку плавления. Небольшое количество данного вещества смешивают с таким же количеством краски (фуксин, метиленовая синь), помешают в пробирку, запаивают ее и устанавливают в вертикальном положении между стерилизуемым материалом. При должной температуре вещество-индикатор плавится и окрашивается в цвет использованного красителя.
Рис. 29. (Внизу)Схема вертикального и горизонтального автоклава:
/(— вертикальный автоклав: /—подставка; 2 — водомерная трубка; 3— воройка; 4—предохранительный клапан; 5— манометр; й— крышка; 7—винтовые зажимы; S— котел; 9— кожух;
10— камера стерилизации; // — водопарокая камера; /2 —паровыпускной клапан. Я —горизонтальный автоклав: У —постамент; 2 — нагревательный элемент; 3 — крышка котла; 4—предохранительный клапан; J—вентиль; 6— кожух; 7—паровая камера; 8— стерили-зационная камера; 9 — манометр паровой камеры; 10 — трехходовой кран; // — сифонная трубка паровой камеры; 12 — опорное кольцо; 13 — крышка паровой камеры; 14— штурвал; /5—впускной кран; /6—манометр котелка; 17— трехходовой кран котелка; 18— сифонная трубка котелка; 19— патрубок; 20— воронка; 21 — водоуказательная колонка; 22— котелок
При повышении давления пара соответственно повышается и температура в автоклаве; так, при давлении 50,6 кПа температура будет 110...И2Х, При 101,ЗкПа — 120...I21, при 151,9кПа-124...126, при 202,6 кПа - 132...133 X.
Манометры регистрируют давление пара без учета окружающего атмосферного давления {760 мм рт. ст.). По истечении времени стерилизации автоклав отключают. После охлаждения при нулевом показании манометра открывают кран для спуска пара. Крышку автоклава подают осторожно на себя, не заглядывая в котел, оберегая лицо от возможного воздействия остаточного пара. До полного выхода пара открывать крышку автоклава нельзя, так как при быстром падении давления внутри автоклава стерилизуемые жидкие среды закипают, пробки из пробирок выталкиваются вместе с жидкостью.
В автоклаве стерилизуют питательные среды, выдерживающие нагревание выше 100 °С, стеклянную посуду, завернутую в бумагу, перевязочный материал, халаты, помещенные в металлические биксы. Кроме того, обеззараживают использованные бактериальные культуры, посуду. В этих случаях давление пара и экспозиция стерилизации продолжительнее (151,9кПа— 1 ч), чем при стерилизации чистого материала (50,6..Л01,ЗкПа — 30...40 мин).
Для проверки качества работы автоклава, соответствия показаний манометра и температуры пара используют различные вещества (бензонафтол, антипирин, сера), имеющие определенную точку плавления. Небольшое количество данного вещества смешивают с таким же количеством краски (фуксин, метиленовая синь), помешают в пробирку, запаивают ее и устанавливают в вертикальном положении между стерилизуемым материалом. При должной температуре вещество-индикатор плавится и окрашивается в цвет использованного красителя.
Устройство горизонтальных автоклавов конструктивно отличается от вертикальных, но принцип действия остается таким же.
Стерилизация фильтрованием. Осуществляется пропусканием материала через бактериологические фильтры. Фильтрация связана не только с пропусканием или задержкой фильтром мельчайших частиц (бактерий) в зависимости от величины пор фильтрующей пластинки, но и с адсорбционной способностью материала, из которого сделан фильтр. Обычно фильтруют жидкости, не выдерживающие нагревания (сыворотки, растворы антибиотиков и др.). При фильтрации
Рис. 30. Фильтр Зейтца:
/ — стеклянная колба Бунэена; 2 — канюля для отсасывания воздуха; 3 — металлический держатель; 4 — фильтр
ные пластины из смеси асбеста с целлюлозой. Отечественные асбестовые фильтры имеют марки Ф2 и СФ. Стерилизующими являются фильтры марки СФ.
Мембранные (ультра-) фильтры (колло-дийные мембраны) имеют вид тончайших листков белой бумаги. Готовят их из геми-целлюлозы, обработанной соответствующими реактивами, температурой и прессованием. Эти фильтры различают по диаметру и величине пор. Используют их для фильтрации, концентрации частиц, содержащихся в фильтруемой жидкости, а также для определения величины вирусов.
Стерильность полученных фильтратов проверяют посевом на питательные среды с последующим выдерживанием в термостате несколько дней.
Стерилизация ультрафиолетовым излучением (УФИ). В лаборатории источником УФ-излучения обычно служат специальные бактерицидные лампы. УФ-облуче-ние используют для обеззараживания воздуха в помещениях (боксах, операционных). Бактерицидные лампы нашли также применение в торговле и пищевой промышленности при хранении различных продуктов при температуре выше 0 °С.
Ультразвук. Используют определенную частоту как физический стерилизующий фактор, например для обеззараживания соды, стерилизации молока, некоторых консервированных продуктов, кожевенного сырья.
Химические методы. Для стерилизации питательных сред и лабораторной посуды непригодны. Их чаще используют для консервирования некоторых субстратов, так как они в бактерицидных концентрациях парализуют ферментативную способность бактерий.
В некоторых случаях для стерилизации применяют биологические МЕТОДЫ.
Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 1169 | Нарушение авторских прав
|